CBM融合位置对AuMan5A酶学性质的影响

为探讨碳水化合物结合结构域(CBM)不同融合位置对Aspergillus usamii 5家族β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响,将Thermotoga maritima 27家族CBM分别融合至其C和N末端,构建出融合酶基因Auman5A-cbm27和cbm27-Auman5A。将Auman5A和融合酶基因分别在Pichia pastoris GS115中表达,分析比较表达产物AuMan5A、AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A的酶学性质。结果表明:AuMan5A、AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A的最适温度Topt分别为70、70℃和60℃;其中AuMan5A-CBM27在68℃及以下保温1 h残余酶活均大于85%,与原酶相比,其热稳定性提高了约8℃,而CBM27-AuMan5A在58℃及以下保持稳定,与原酶相比,降低了2℃。3种酶的最适pH均为4.0;AuMan5A在pH值2.5～7.5范围内保持稳定,2种融合酶在pH 2.0～9.0内均能保持稳定。与AuMan5A相比,AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A对角豆胶的Km分别降低了45.0%和26.3%。通过比较3种酶的酶学性质,证实CBM不同融合位置对AuMan5A酶学性质具有重要影响。     

碱性脂酶测定方法的研究

通过对ＰＧ３７圆弧青霉所产碱性脂肪酶及同类酶的测定方法研究和比较，对碱性脂肪 测定提出了新的方法，该方法较原有方法简单，并能节省部分实验材料，可为国内碱性脂肪酶测定标准的制定提供一定的理论基础。     

脂肪酶分子生物学的研究进展

迄今为止已克隆了包括微生物和动植物在内的众多脂肪酶基因，测定了它们的核苷酸序列，从而确定了这些酶的一级结构。作者重点就有关微生物脂肪酶的基因克隆、核苷酸及氨基酸序列分析和基因表达等分子生物学内容作一综述。     

圆弧青霉PG37碱性脂肪酶的研究

圆弧青霉突变株ＰＧ３７是一株高产碱性脂肪酶生产菌，摇瓶酶活为５０５２ｕ／ｍｌ，作者对ＰＧ３７发酵产酶工艺及脂肪酶的酶学特性等进行了系统的研究。结果表明圆弧青霉ＰＧ３７的摇瓶最适工艺条件为：装液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶；摇瓶转速２５０ｒｐｍ；培养温度及时间分别为２８℃和９６小时；起始ｐＨ７．５；发酵过程中第３６、５４和７２小时洛流加０．４％棉籽油。ＰＧ３７肥肪酶的最适作用ｐＨ为１０．０－１０．５     

β—甘露聚糖酶及其水解产物的应用研究

β－甘露聚糖酶水解植物产物－甘露低聚糖,具有促进人体道内双歧杆菌等有益菌增殖、抑制肠道原菌繁殖及增强人体免疫力等的生理功能。本文就有关β－某露聚糖酶的微生物生产、一般理化特性和应用等内容作一综述。     

果胶酶生产及其在苹果汁澄清中的应用

对黑曲霉(Aspergillus niger)LLW-1菌株固态发酵生产酸性果胶酶的发酵培养基组成和发酵条件以及利用果胶酶澄清苹果汁的工艺条件进行了研究。固态发酵产酶条件为:250 mL三角瓶装10 g基料(豆饼∶麸皮=2.0 g∶8.0 g),(NH4)2SO420 g/kg,Tween-80 1.5 g/kg,玉米浆50 mL/kg,KH2PO43.0 g/kg,CaCl21.0 g/kg,MgSO4.7H2O 1.0 g/kg(均相对于基料),料水比1∶1.2,自然pH;31℃静置培养72 h,期间在为24 h翻曲1次,果胶酶活力达2 418 IU/g(干曲)。酸性果胶酶澄清苹果汁的工艺条件为:果汁自然pH值,果胶酶用量500IU/L(果汁),明胶添加量0.05 g/L(果汁),酶解温度和时间分别为45℃和1 h。     

宇佐美曲霉环氧化物水解酶基因的克隆与生物信息学分析

环氧化物水解酶(Epoxide hydrolase,EH)是酶法拆分消旋体环氧化物,制备光学活性环氧化物和邻二醇的重要酶之一。通过RT-PCR和新构建的THSO-PCR侧翼未知DNA序列扩增技术,克隆了一种来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的EH基因,命名为Aueh2(GenBank No.KF061095),并对该基因进行了相关生物信息学分析。Aueh2的DNA序列长度为2 481 bp,其中包含了5′端和3′端侧翼调控序列,6个内含子序列和编码cDNA序列。开放阅读框序列长度为1 188 bp,编码395个氨基酸,对应的蛋白质命名为AuEH2;该蛋白质为无信号肽的亲水蛋白质,其理论相对分子质量44.6 kD;其三维结构包含EH典型的"α/β"核心催化结构域和"帽子"结构域,活性中心由催化三联体Asp191、His369和Glu343组成。本课题研究成果为深入研究AuEH2及其应用奠定了基础。     

酸性β-甘露聚糖酶固态发酵工艺与粗酶性质

用宇佐美曲霉菌株（Aspergillus usamii YL-01-78）进行固态发酵生产酸性β-甘露聚糖酶,其曲盘发酵的最优工艺为：培养基最初料水比为1：1.4,起始pH自然,接种量10%（相对于干物料）,通过中间补水和翻曲,31℃培养72h,最高酶活可达3183IU/g干曲.对酶学性质初步研究显示：酶的最适反应温度和pH分别为70℃和3.5,低于60℃、pH5.0～8.0酶稳定,Ca^2＋、EDTA对酶有激活作用,Mn^2＋、Pb^2＋、Sn^2＋、Fe^3＋、Cu2^＋、Al^3＋、Fe^2＋对酶有一定的抑制作用.     

脂肪酶氨基酸及其二联体与最适温度的相关性分析

基于34条微生物脂肪酶序列,用多元逐步回归法分析了影响脂肪酶最适温度的氨基酸及其二联体.结果表明:与最适温度呈正相关性的氨基酸是Y,负相关性的有I、S、K;呈正相关性的氨基酸二联体有IR、KS、NY、SA、ST和YR,负相关性的有DK、DY、IS、KA、WS、YS和QI.通过对相关性氨基酸二联体在耐热和不耐热脂肪酶中空间位置的分析发现:与最适温度呈正相关性的氨基酸二联体多数位于α-螺旋区,且分布在酶蛋白表面;而呈负相关性的多数位于β-折叠区和无规则卷曲区,一般分布于酶蛋白内部,并常出现在多肽链的N或C端.     

微生物发酵酶的染菌对策

本文介绍了糖化酶，α－淀粉酶和碱性脂肪酶发酵过程中发生染菌情况下的对策，做到尽可能防止发酵染菌的发生，一旦发生染菌，针对不同的微生物菌种，采取相应有效的措施，把发酵染菌造成的损失降低到最小。