百日咳流行病学特征及防控进展

百日咳是一种古老的疾病,早期疫苗接种大大降低了百日咳的发病率和病死率。但近年来百日咳再现的情况在全球范围内不断被报道,进一步掌握百日咳流行病学特征,对于研发更有效的百日咳疫苗以及更好地防控和早日消除百日咳至关重要。本文主要就国内外百日咳基本流行特征、血清和分子流行病学特征以及防控进展作一综述。     

模拟振动后组分无细胞百白破联合疫苗的稳定性评价

目的 评价模拟振动后组分无细胞百白破联合疫苗（diphtheria,tetanus,and acellular component pertussis combined vaccine,DTacP）的稳定性。方法 选取3批中国医学科学院医学生物学研究所自主研制的DTacP,根据国家标准GB/T 4857.23-2012规定的方法进行随机振动试验。对振动前后的3批样品进行上清中抗原含量测定、Zeta电位测定、电镜观察、效价测定、鉴别试验、物理检查（外观、装量、渗透压摩尔浓度）、化学检定（pH、铝含量、游离甲醛含量）、无菌检查、特异性毒性检查及毒性逆转试验,评价疫苗的稳定性。结果 振动前后,3批DTacP上清中百日咳毒素（pertussis toxin,PT）、丝状血凝素（filamentous hemagglutinin,FHA）及黏附素（pertactin,PRN）抗原含量均值差异均无统计学意义（t=0.16～1.73,P均> 0.05）,白喉类毒素（diphtheria toxoid,DT）及破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）均未检测到絮状反应;Zeta电位均值...     

去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素纯化液中内毒素TritonX-114液相分离法的建立及其效果评价

目的 建立去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素（filamentous hemagglutinin,FHA）纯化液中内毒素的TritonX-114液相分离法,并评价其效果。方法 以影响TritonX-114液相分离法效果的TritonX-114加入量、4℃混匀时间、37℃分层时间、25℃16 743×g离心时间为试验因素,每个因素设计3个水平,通过正交试验设计12组试验。每组试验获得的样品均检测蛋白回收率,以蛋白回收率最高的条件为最佳。采用最佳条件去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素,检测FHA蛋白含量、内毒素含量及TritonX-114残留量。结果 TritonX-114液相分离法最佳条件：TritonX-114加入量为1%,4℃混匀时间为30 min,37℃分层时间为60 min,25℃167 43×g离心时间为10 min。最佳条件下去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素后,内毒素含量均<0.25 EU/mL,TritonX-114残留量均值为0.183%,蛋白回收率均值为91.04%。结论 TritonX-114液相分离法能够有效去除无细胞百日咳疫苗FHA纯化液中的内...     

吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株主要保护性抗原基因序列的遗传稳定性及理化性质的稳定性

目的对吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株的主要保护性抗原基因序列遗传稳定性及理化性质稳定性进行研究,为无细胞百白破疫苗的安全性和有效性提供依据。方法分别从百日咳、白喉和破伤风疫苗生产用菌株的主代、工作代、疫苗生产用工作种子(P1)、P2、P3(P1后再传2代)的菌体全基因组DNA中,扩增出百日咳主要抗原组分[百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、外膜蛋白(pertactin,PRN)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)]、白喉主要抗原[白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)原液]、破伤风主要抗原[破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)原液]的基因序列,克隆至p LB-Simple Vector,转化E.coli DH5α,测序后,运用DNAMAN软件与Gen Bank中登录的相应序列进行比对和分析。按照《中国药典》三部(2015版)相关方法,进行菌株理化性质稳定性检测。结果生产用百日咳、白喉、破伤风菌株的主代、工作代、P1、P2、P3的主要抗原基因序列大小及同源性与预期一致,理化性质稳定。结论吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株的主要保护性抗原基因序列遗传稳定,理化性质稳定。     

去除百日咳毒素、丝状血凝素中内毒素的工艺探索

目的探讨无细胞百日咳疫苗纯化工艺中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的内毒素去除问题。方法选用Triton法和离子交换层析法,分别对百日咳杆菌发酵液上清和经Capto SP Imp Res柱纯化的发酵液进行内毒素去除,按《中国药典》三部(2015版)相关方法检测纯化样品的蛋白含量、内毒素含量、抗原含量,并进行SDS-PAGE分析。结果使用Triton法和离子交换层析法均可以将FHA和PT这两种成分的内毒素在脱毒前阶段降低至200 EU/mg以下。在合适的纯化条件下使用离子层析去除内毒素的能力高于Triton法,而在对抗原的回收率上Triton法又稍占优势。结论使用Triton法和离子交换层析法均可解决FHA和PT去除内毒素的问题,两类工艺下对目的蛋白活性的影响有待进一步研究。