抗菌肽PR-39重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定

目的构建抗菌肽PR-39(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)重组腺病毒表达质粒。方法从含抗菌肽PR-39核心编码区的质粒中扩增PR-39基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组穿梭质粒,经PmeⅠ酶切线性化后,转化感受态AdEasier细胞,构建重组腺病毒质粒,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度检测。将重组腺病毒感染鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2,通过荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的表达,RT-PCR法检测PR-39基因的转录水平。结果重组腺病毒穿梭质粒pAd-Trace-TO4-PR-39经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组腺病毒质粒pAdPR-39经PacⅠ酶切鉴定,证明目的基因已整合到腺病毒基因组中;第4代重组腺病毒AdPR-39的病毒滴度为1010IU/ml;感染重组腺病毒AdPR-39的C3H10T1/2细胞可表达RFP;PR-39基因在C3H10T1/2细胞内成功转录。结论已成功构建携带RFP的PR-39重组腺病毒表达质粒,在鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中可高效表达。     

液压压边拉伸模架

当生产较大的圆筒形拉伸件时,有的需要数吨或几十吨的压边力。如果产品规格品种多,板料厚薄不一时,还需要改变压边力。在一般的机械压力机或单动液压机上,只能作无压边拉伸或变薄拉伸,在一般模具结构上加装橡皮、弹黄或气压的压边装置,也只能解决小件的拉伸问题。针对上述情况,我们设计制造了一种以液压源为动力的通用型拉伸模架。这种模架可以用于高压锅、各种锅盖、锅身、盆、盒以及煤     

关于筒形件的拉延参数

<正> 在冷冲设计和现场工作中,从事本专业的同志们都不同程度地发现拉延参数中的拉延系数,实际采用的与资料上的差距较大,这种差距给实际工作者带来了困难,初学者辨别不清。这有两方面的原因:一方面是对影响拉延变形的许多其它因素未计入系数中去;另一方面,按照传统的设计计算方法,     

心杆套冷挤成形及模具设计

<正> 心杆套零件如图1,通过多种技术方案的分析论证,最后以冷挤压为最佳方案,因为它具有生产速度快、操作简单、材料利用率高和确保产品质量等优点。 本文着重从5个方面综合总结心杆套在研制过程中的工艺分析、产品材料选择、质量控制、模具设计以及通过批量生产后工艺和模具的改进。图2即心杆套冷挤工艺图,产品最小内径φ4.4和外圆弧R7.8采用机加工配合完成。     

人参皂苷Rg1对白消胺诱导细胞衰老的延缓作用

目的探讨人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对白消胺(Busulfan,BU)诱导的人胚肺成纤维细胞衰老的延缓作用。方法将人胚肺成纤维细胞(<24代)随机分为空白对照组(常规培养)、BU组(以120μmol/L BU处理复制细胞衰老模型)、BU+Rg1组(120μmol/L BU+10μmol/L Rg1)、Rg1预+BU组(10μmol/L Rg1预处理后加入120μmol/L BU)和Rg1预+BU+Rg1组(10μmol/L Rg1预处理后加入120μmol/L BU,再加入10μmol/L Rg1),通过倒置显微镜观察细胞形态的变化,细胞增殖试验检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期的分布;半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察细胞衰老情况。结果 BU组细胞胞体扁平、宽大、不规则,出现空泡,而Rg1处理各组细胞的衰老表型出现一定程度的改善,以Rg1预+BU+Rg1组效果最佳,但未完全恢复;BU组细胞增殖能力较空白对照组明显降低,Rg1处理组细胞增殖能力有所恢复,且随着时间的延长效果越明显,其中以Rg1预+BU+Rg1组最佳;Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组G2/M期比例较BU组显著降低(P<0.05),其中以Rg1预+BU+Rg1组降低最明显;Rg1预+BU组和Rg1预+BU+Rg1组衰老细胞数较BU组显著降低(P<0.05)。结论 Rg1能有效对抗BU诱导的细胞早衰,其具体作用机制有待进一步深入研究。