Tween-80对Pichia pastoris表达重组人复合α干扰素聚合的影响研究

在5 L发酵罐使用Pichia pastoris表达重组人复合α干扰素(cIFN),考察了Tween-80添加量(以质量体积比计)及添加时间对单体cIFN表达量、生物活性及菌体生长的影响.结果表明,诱导相温度为25℃时,添加0.01% Tween-80能明显抑制cIFN发生聚合,单体含量从41.2%显著提高到 82.3%;添加0.04% Tween-80后,生物活性从1.91×108 IU·mL-1提高到3.73×108 IU·mL-1;在诱导开始后不同时间加入0.02% Tween-80,一段时间后cIFN单体表达量均明显提高.且Tween-80的添加并不影响总蛋白表达和菌体生长.     

幼小仓鼠肾细胞(BHK21)低血清驯化及代谢比较

以幼小仓鼠肾细胞(BHK21)为研究对象,将DMEM培养基中血清体积分数从15%降至1%进行驯化培养.比较驯化过程中细胞的生长变化;同时测定血清体积分数由15%降至2%的过程中,培养液中葡萄糖、谷氨酰胺等氨基酸以及乳酸、氨的浓度变化.结果表明,血清体积分数由15%降至2%,细胞生长的延迟期延长96 h;同时细胞对葡萄糖、谷氨酰胺的代谢速率以及乳酸的积累速率都降低了50%,而氨的积累速率降低了29%.     

生物搅拌反应器内混合情况的CFD模拟及在发酵中的应用

用计算流体力学(CFD)方法模拟了50 L生物反应器中不同的,搅拌桨组合对搅拌流场、混合时间的影响,并从流体力学角度对生物反应器搅拌桨组合进行了优化.将模拟优化结果用于重组大肠杆菌发酵过程,结果表明,优化后的搅拌桨组合可以改善发酵罐内部的流场和气体分布,能够明显降低获得相同溶氧所需的转速和最大通气量,而菌体生物量和产酶水平也略有提高.     

增强组成型重组大肠杆菌质粒稳定性的发酵策略

质粒稳定性是影响基因工程菌外源蛋白表达的重要因素,同时,外源蛋白的表达又影响着质粒稳定性。与诱导型表达系统相比,在组成型表达系统中,由于外源蛋白的持续表达,导致细胞代谢负担加重,质粒稳定性的控制更加困难。通过对组成型大肠杆菌DH5a／pKKFPGA发酵过程的优化,增强了质粒稳定性,发酵结束时,仍然维持在85％左右,表达产物粪产碱杆菌青霉素酰化酶的酶活单位达到23384U·L^-1。     

生物工程设备课程建设的思考与实践

生物工程设备是生物工程专业的核心课程。本文结合教改实践,阐述了华东理工大学生物工程设备课程的历史沿革、挑战与机遇,以及课程体系、教材建设、课堂教学、实践环节、师资队伍建设等的教改实践,并对该课程建设中存在的问题和可能遇到的困境,提出了解决的设想。     

红曲色素高产菌株的高通量选育

该文结合24深孔板微型化培养和酶标仪检测,建立了红曲色素高产菌株的高通量筛选方法,此法简单、快速、准确且自动化水平较高.确定最佳培养条件为装液量1.2mL/孔(每孔体积为10mL),接种量9％;找出红曲色素最大吸收峰值,确定酶标仪检测波长为530nm;通过紫外-氯化锂复合诱变处理,经过高通量筛选获得9株正突变株,其中菌株D39微孔板发酵色价达42.7U/mL,比出发菌株提高了46.2％;将D39分离纯化并用摇瓶验证,得到纯菌株D39-4的摇瓶发酵色价为206.5U/mL,比出发菌株提高了51.1％,具有很好的工业应用前景.     

杂交瘤细胞流加培养中葡萄糖和谷氨酰胺的代谢控制

对底物限制的流加培养中杂交瘤细胞HB 58的生长、代谢和单抗生成进行了研究。葡萄糖或 谷氨酰胺限制引起比生长速率下降。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,细胞对葡萄糖的得率增 加,乳酸对葡萄糖的得率降低,说明葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,细胞和氨对谷氨酰胺的得率增加,丙氨酸对谷氨酰胺的得率减小,说明谷氨酰胺更多地参与脱氢反应,其有效利用率得到提高。     

中心组合设计优化梅岭霉素发酵培养基

应用中心组合设计对梅岭霉素发酵培养基进行优化。通过部分因子实验对发酵培养基进行评估，确认玉米粉、淀粉和酵母粉是影响梅岭霉素发酵水平的关键因子，通过快速登高法搜索关键组分的适宜浓度范围。在此基础上，采用中心组合设计方法，基关键因子的数学模型，确定关键组分的最佳浓度与优化后的培养基并进行实验验证。经上述优化过程，梅岭霉素发酵单位从51．3μg/ml提高到至231．8μg/ml。     

增强细胞渗透性对酿酒酵母ATP合成活力的作用研究

研究了一株啤酒酵母在不同培养条件下生长的细胞渗透性及其ATP合成活性,实验检测了氧限制条件下生长酵母的的细胞渗透性,并选用有机溶剂、超声波和气流干燥等通透方法,对培养细胞的渗透性进行了增强处理,考察细胞的渗透性变化对其ATP生产活性的作用。结果表明：渗透性较差的细胞,其ATP生产活力也相对较低,催化腺苷（Ado）生产活性的作用,结果表明：渗透性较差的细胞,其ATP生产活力也相对较低,催化腺苷（Ado）生产ATP转化率低于20％的培养细胞(A-细胞）经通透处理后,转化率能提高30％－100％;渗透性较好、转化率较高的培养细胞（M－细胞）经通透处理后,其完成ATP合成反应的时间相对能缩短1－2h,催化反应速度明显提高。经通透化处理的细胞能更有效地解释胞内物质和表现出较高的乙醇脱氢酶（ADH）和已糖激酶（HK）活性,其ATP生产活性得到不同程度的提高。     

柠檬酸钠对肌苷发酵过程代谢流分布的调节

基于物料的质量守恒定律和中间代谢物的拟稳态假设,定量研究了柠檬酸钠对肌苷发酵过程不同时段代谢流分布的影响.结果表明,添加的柠檬酸钠能够抑制存在于EMP途径和TCA循环之间的“碳源溢流”.在24 h以后, EMP途径的代谢通量平均降低33％,HMP途径通量平均增加76％,肌苷合成途径通量平均增加77％,最终产苷由17.44 g•L^-1提高到24 g•L^-1, 增幅达37.6％.