产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究

对一株产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌的发酵条件进行了优化，确定其最适培养基配方为豆饼粉3％、玉米粉3％、麸皮2,5％、KH2PO4 0.05％、Na2HPO4 0．4％，最适摇瓶培养条件为种龄8h、接种量2％、装液量50mL／250mL、摇床转速180r／min、32℃培养33h，中性蛋白酶的摇瓶发酵单位最高可达4830U／mL。     

纳豆激酶液态发酵工艺优化

在单因素实验的基础上,用响应面法和正交实验对Bacillus subtilis液态发酵生产纳豆激酶的培养基和发酵条件进行了优化。实验结果表明,最佳产酶培养基组成为麦芽糖2%,酵母膏4%,CaCl20.03%,pH7.0;最佳发酵条件为接种量1%,培养温度34℃,摇床转速200r/min,装液量100mL/500mL(挡板瓶),培养48h达到产酶高峰,产酶活力可达4300U/mL。     

溶栓纳豆芽孢杆菌的筛选鉴定及产纳豆激酶条件的研究

利用目标纳豆芽孢杆菌(Bacillus Natto)所应具有的耐热性、耐盐性、显著的蛋白酶活性及生物素缺陷等生物学特性,设计了定向选育方案,从日本传统食品纳豆中筛选出具有较高纤溶活性的8株枯草芽孢杆菌,命名为 NK-1～NK-8；根据菌落形态、生理生化特征,鉴定为纳豆芽孢杆菌。NK-4菌株经过发酵培养,液体培养指数生长期为4～12h,最佳产酶条件是 pH7．0,培养温度34℃,装液量100mL/500mL。     

标准化在微生态制剂产品开发中的作用

在经济全球化的21世纪,各国已构成一个整体性大市场,新的垄断形式是专利标准化,而标准已步入国际化的时代,中国在加入世贸组织时签订了TRIPS与TBT协议,后者是关于技术标准的贸易技术壁垒协议,本文提出了克服技术壁垒在国家与企业两个层次应采取的标准化战略及一些建议.     

纳豆纤溶酶--纳豆激酶的分离提纯及稳定性研究

实验采用硫酸铵分步盐析，Sepharose Butyl Fast Flow疏水层析，Sephamse CM Fast Flow离子交换层析和Superdex75凝胶层析，对纳豆浸提液进行分离纯化，得到电泳纯的纳豆激酶。并研究了纳豆激酶的稳定性，实验结果表明，温度对酶活影响显著；pH6—8范围内酶活相对稳定；Zn^2＋、亚硫酸钠对酶活有较大的抑制作用；Al^3＋、Cu^2＋苯甲酸钠对酶也有一定程度的抑制；Mg^2＋、Ca^2＋、甘油、明胶、蔗糖、香精是较好的酶活稳定剂和促进剂。     

固体豆粕为氮源根霉12~#产纤溶酶液体发酵条件的优化

以固体豆粕为氮源,通过单因素、Plackett-Burman试验设计和正交试验,从无机氮源、胰蛋白胨、初始pH值、接种量和发酵周期方面优化了中华根霉12#产纤溶酶的液体发酵条件.试验结果表明,该菌株液体发酵产纤溶酶的适宜培养基组成为:麸皮水5%,豆粕粉6%,NaNO30.2%,NH4Cl 0.1%,胰蛋白胨2.5%,初始pH4.3;适宜的培养条件是:接种量20%,发酵周期60h,纤溶酶酶活力为182.00U/mL.     

啤酒冷混浊蛋白的分析及硅胶、PVPP吸附效果比较

利用SDS—PAGE电泳对3种不同品牌的啤酒中的冷混浊蛋白进行分析,结果表明,引起啤酒冷混浊的蛋白分为醇溶性蛋白和水溶性蛋白。其中醇溶性冷混浊蛋白占总含量的70％左右,分子量在43～50kDa之间。水溶性冷混浊蛋白的分子量在8～14kDa之间。另外,比较硅胶、PVPP的吸附效果,经二者处理后的样品浊度都有明显的下降,但经硅胶处理后的样品浊度更低一些。比较硅胶吸附前后样品的泡持时间没有很大的变化,而经PVPP处理后的样品泡持时间有一定的改变。因此,在啤酒生产过程中添加硅胶,能够有效地除去啤酒冷混浊蛋白,而且不会影响啤酒的泡持性。     

杂色云芝漆酶用于提取人参总皂甙的研究

采用正交试验,对水浸提取条件、漆酶酶解条件进行了研究。结果表明人参总皂甙最佳提取工艺为:先用漆酶酶解,每克人参加入15ml漆酶粗酶液(92U/ml),在30℃、pH3.5的条件下酶解1.5h,然后水浸提取人参总皂甙。经过漆酶酶解处理后人参总皂甙提取率比水浸提取法提高了70.9%。     

3-甾酮-△1-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶,能催化3-甾酮化合物在C1,2位处脱氢,提高原有底物的生物活性.利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-△1-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,并用分光光度法检测酶的活力.结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍.     

Rhizopus chinensis 12^#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12^#(Rhizopus chinensis 12^#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分．采用饱和度40％--70％的硫酸铵溶液分步盐析、Octyl Sepharose Fast Flow疏水层析、Q-Sepharose High Performance离子交换层析和Sephacryl S-100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯，得到电泳纯的纤溶酶．SDS—PAGE方法测定该酶相对分子质量为18 000，凝胶过滤方法测定相对分子质量为16 600，表明该酶由单亚基组成。