重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺的优化

目的优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺。方法采用试验设计(Design of Experiment,DOE)方法优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺,试验因子为中间清洗液Na Cl浓度(130~870 mmol/L)和洗脱液p H(3.50~4.20),试验响应变量为纯化后样品收率、纯度、残余宿主蛋白含量、外源DNA含量及蛋白A含量,通过DOE构建模型,预测中间清洗液Na Cl浓度和洗脱液p H范围。同时采用DOE方法验证预测工艺参数的稳定性。结果确定中间清洗液Na Cl浓度为400~700 mmol/L,洗脱液p H为3.55~3.75。试验因子在该参数范围内变动时,样品收率均大于80%,纯度均大于97%,外源DNA浓度均低于260 pg/mg,宿主蛋白含量均低于2 300 ng/mg,蛋白A含量均低于6.5 ng/mg。结论成功优化了重组抗CD52单克隆抗体的亲和纯化工艺,且具有较好的稳定性。     

高压中压双调压变压器抗短路能力分析与试验研究

针对高压和中压同时带调压的两种变压器结构进行了对比分析,从耗材、制造等方面论述了轴向排列结构的优越性,并通过突发短路试验论证轴向排列结构抗短路能力的合理性。     

中央空调计费系统

针对中央空调传统收费方式的弊端提出了按实际使用情况进行计费的方案,介绍了该方案的原理、结构和主要模块及其功能。     

抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方的初步筛选

目的初步筛选抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方组成。方法以PBS为缓冲体系,聚山梨酯-80(Tween-80)为表面活性剂,乙二胺四乙酸(EDTA)为抗氧化剂及溶液不同pH值为关键因素,实验设计(Design of Experiment,DOE)10组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,分别进行加速稳定性试验[40℃保存0、1、7及14 d],分析单克隆抗体主要质量属性[分子排阻-高效液相色谱(size-exclusive-high performance chromatography,SEC-HPLC)和毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)分析纯度,毛细管等点聚焦(capillary isoelectric focusing,cIEF)分析电荷变异体,动物实验检测抗体效价)]变化,初步确定制剂最适配方。结果单克隆抗体制剂经SEC-HPLC分析,1、2、9及10制剂配方组纯度较好,经CE-SDS分析,1、2、7～10制剂配方组纯度较好;经cIEF分析电荷变异体,2及9制剂配方组保护效果较好;经动...     

重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证

目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证。方法测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞。以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人Ig G结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数。通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性。并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证。结果淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率最高,确定该细胞为靶细胞。CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4%~111.9%之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10%以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93%~114.42%之间,RSD值在10%以内,3 d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20%以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50%~150%范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.045 2 x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定。结论该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测。     

基于8051的CF卡文件系统的实现

介绍了CF卡的基本结构和工作原理．设计了8051与CF卡的接口电路和系统软件．按照FATl6格式实现了基于8051的CF卡件系统，并在无纸记录仪的数据存储中得到应用。     

单克隆抗体表位分析技术的研究进展

单克隆抗体具有高度均一性及对靶分子的高亲和性、特异性,已广泛应用于自身免疫性疾病、炎性疾病和癌症的治疗。单克隆抗体与相应抗原的反应性决定于其所识别的抗原表位,确定相应表位在抗原结构上的位置是单克隆抗体筛选中的关键步骤。本文主要对几种单克隆抗体表位的分析方法,包括ELISA法、生物酶解法及化学切割法、噬菌体随机肽库、X-射线晶体学、丙氨酸扫描、氢氘交换质谱(hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry,HDX-MS)、生物信息学表位预测方法的原理、特点及研究进展作一综述。     

抗破伤风毒素单克隆抗体细胞培养基的筛选与优化

目的 对抗破伤风毒素单克隆抗体细胞培养基进行筛选与优化.方法 首先通过评估多种商业无血清培养基中抗破伤风毒素单克隆抗体工程细胞株CHO-K1-G2的生长及代谢参数,筛选出一种进行组分优化的基础培养基;再利用试验设计(Design of Experiments,DOE)的方法从23种培养基添加物中筛选出能够显著促进细胞蛋...     

不同通气方式对抗破伤风毒素抗体工程细胞株生长及蛋白表达的影响

目的探讨生物反应器不同通气方式对抗破伤风毒素抗体的CHO工程细胞株生长、代谢及目的蛋白表达的影响。方法在3个3 L生物反应器中,分别选用微泡、大泡和膜供氧的通气方式,以相同的初始密度接种CHO种子细胞,设置相同的温度、pH、搅拌速度、溶氧(dissolved oxygen,DO)等关键培养参数,采用补料分批培养模式进行培养。每日取样,分别检测培养液的活细胞密度(viable cell density,VCD)、细胞活率、渗透压及葡萄糖、乳酸、NH₄⁺和抗体蛋白浓度。筛选细胞生长较好及乳酸等代谢副产物累积较少且蛋白表达量高的一种通气方式。结果微泡通气方式下,CHO细胞生长缓慢,最高VCD为7.63×10⁶个/mL,接种后细胞活率一直低于90%且下降较快,培养8 d,抗体蛋白浓度为76 mg/L。大泡通气方式下,最高VCD为12.45×10⁶个/mL,培养1～6 d细胞活率均高于90%,培养第8天乳酸浓度开始下降,培养10 d,抗体蛋白浓度为534 mg/L。膜供氧通气方式下,最高VCD为13.54×1...