试论柠檬酸三钠的生产

以含淀粉物质或糖类物质为主要原料，经黑曲霉菌种发酵得含柠檬酸的发酵醪以后，可分别提取制备柠檬酸和柠檬酸三钠产品。本文主要论述柠檬酸的黑曲霉菌种发酵和柠檬酸三钠的生产工艺技术，针对不同要求的柠檬酸三钠产品，设计了不同的工艺路线，有利于取得最佳的经济效益。     

茶树菇深层发酵培养基的优化

采用摇瓶发酵法研究了不同碳源、氮源对茶树菇菌丝体干重及胞外多糖产量的影响,结果表明,茶树菇深层发酵最适的碳源为玉米粉,最适的氮源为酵母粉,并通过正交实验优化了深层发酵培养基。     

宇佐美曲霉羧肽酶成熟肽基因的表达及鉴定

目的克隆、表达宇佐美曲霉(Aspergillus usami)羧肽酶成熟肽基因,并检测其酶学性质。方法根据前期克隆的宇佐美曲霉羧肽酶基因序列设计引物,克隆羧肽酶成熟肽基因AucpA,构建重组表达质粒pPIC9k-AucpA,电击转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导重组蛋白表达。表达的重组蛋白经Sephadex-50层析纯化后,进行酶活性及其影响因素的检测。结果重组表达质粒pPIC9K-AucpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约81 000,纯化的重组羧肽酶最高比酶活为57.15 nkat/mg,最适反应温度为45℃,最适反应pH为3.5,金属离子、EDTA对重组羧肽酶的酶活性无影响,而PMSF对重组羧肽酶酶活性的抑制率达50%以上。结论已成功在毕赤酵母中表达了具有较高酶活的宇佐美曲霉羧肽酶,为进一步研究该重组酶的应用奠定了基础。     

耐热木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

将一种11家族极端耐热木聚糖酶的密码子优化基因Syxyn11克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K-Syxyn11,将其经SalⅠ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115。经G418筛选得到重组工程菌GS115/Syxyn11,用甲醇诱导表达重组木聚糖酶SyXyn11,酶活可达到17.74 U/mL。SDS-PAGE显示,SyXyn11的相对分子质量为31 000。SyXyn11的最适反应温度为85℃,在80℃以下稳定。最适反应pH为6.5,在pH 5.0~7.5范围内稳定。EDTA和大多数金属离子对重组酶的活性影响不大。结果表明Syxyn11成功在P.pastoris GS115中实现表达,而且重组木聚糖酶的耐热性并未改变。     

黑曲霉纤维素酶的特性研究

在黑曲霉突变株ＤＭ－１所产生纤维素酶中，β－葡萄糖苷酶活力较高。采用固体发酵培养，其滤纸酶活和β－葡萄糖苷酶分别为９５和１２００ｍｇ葡萄糖／ｇＤＭｈ。本试验系统研究了该酶的固体发酵培养过程，最适反应温度，热稳定性，最适反应ｐＨ以及ｐＨ对酶稳定性的影响，为该酶在酿造行业中的广泛应用提供参考依据。     

α—淀粉酶测定方法的探讨

本文对国内α－淀粉酶两种主要测定方法进行了系统分析和研究。在实验数据的基础上采用线性回归法，建立了酶浓度与吸光度对数值之间的线性表达式。由于仍采用白磁板法中的标准色作为反应终点标志，故其测定结果与白磁板法结果相一致，有利于两者之间的相互比较和国内α－淀粉酶酶活单位的统一。     

蛋白酶对脂肪活性影响的研究

为了弄清洗涤剂中碱性蛋白酶及金属离子对碱性脂及酶稳定性的问题，对加酶２剂中的碱性蛋白酶及金属离子对圆弧青霉ＰＧ３７所产碱性脂肪酶的活力影响进行了研究。在碱性脂肪酶溶液中分别添加不同量的碱性蛋白酶和金属离子，并在２５℃保温３０ｍｉｎ，分别测定保温前后的脂肪酶力，结果表明，在一定浓度范围内的蛋白酶对ＰＧ３７碱性脂及酶活力的影响较小，可同时应用于洗涤剂中，金属离子对脂肪酶活力明显影响，甚至在一定浓度范围     

环氧化物水解酶PvEH3的表达及手性邻二醇的合成

基于环氧化物水解酶（EHs）一级结构的计算机辅助分析,以菜豆（Phaseolus vulgaris）总RNA为模板,采用逆转录PCR和巢式PCR技术扩增了一种新型环氧化物水解酶（PvEH3）的编码基因pveh3。借助表达载体pET-28a（+）将pveh3导入大肠杆菌BL21（DE3）中进行了异源表达。一级和三级结构表明,PvEH3属于α/β水解酶超家族,其催化三联体为环氧化物水解酶Asp¹⁰¹-His²⁹⁷-Asp²⁶²的表达及手性邻二醇的合成,两个保守质子供体为Tyr¹⁵⁰和Tyr²³²。在20℃、pH7.0的反应条件下,PvEH3能催化环氧苯乙烷及其4种衍生物的对映会聚水解。实验结果表明,PvEH3对环氧苯乙烷及其对位取代环氧底物（93.2%、86.6%和85.1% ee_p）的对映会聚性优于其间位取代环氧底物（37.1%和53.3% ee_p）;PvEH3针对5种环氧底物中的环氧苯乙烷具有最高的区域选择性,区域选择性系数α_S和β_R分别为93.9%和99.0%。PvEH3的发现增加了区域选择性高且互补的EHs数目,为单酶催化环氧化物的对映会聚水解提供了更多的选择余地。     

乙酰木聚糖酯酶协同木聚糖酶降解木聚糖的研究

探讨了宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)乙酰木聚糖酯酶和第10、11家族木聚糖酶之间的协同作用。利用作者所在实验室构建保藏的3株工程酵母Pichia pastoris GS115/Auaxe、GS115/Auxyn11A和GS115/Auxyn10A进行甲醇诱导发酵,分别获得重组乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶。在木聚糖酶最适p H、40℃、料液质量体积比1 g∶60 m L、水解2 h的条件下分别研究了不同加酶量作用于小麦麸皮时生成的还原糖量。结果表明,乙酰木聚糖酯酶与第11家族木聚糖酶有更好的协同作用,并在添加量比(酶活力比)为5∶1时所测协同效果最好,还原糖生成量较木聚糖酶单独作用增加了46%。因此,在乙酰木聚糖酯酶的作用下,木聚糖上乙酰基的去除,对提高木聚糖酶对木聚糖的水解效率具有重要作用。