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本研究以保藏菌种文氏曲霉为出发菌株,经诱变选育获WM—1突变株。该菌株在合适的培养基上培养繁殖,产生大量的富马酸胞内酶,离心制备菌体作为富马酸转化用酶源,将菌体按一定的比例接入富马酸盐转化液,在一定的条件下转化为L—苹果酸盐,最后通过钙盐法提取得L—苹果酸成品。WM—1菌株具有较高的转化能力,转化率达90%以上,转化液浓度达20%以上,适合于工业化大生产。 相似文献
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目的在毕赤酵母中表达全长甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)(1-34)与人血清白蛋白(Human serumalbumn,HSA)的融合蛋白PTH(1-34)-HSA,并检测其活性。方法在质粒pPIC9K-PTH(1-34)2-HSA的基础上设计引物,引入6His标签及肠激酶酶切位点,从该质粒中扩增6His-EK-PTH(1-34)-HSA基因,插入pPIC9K载体中,构建重组表达质粒pPIC9K-6His-EK-PTH(1-34)-HSA,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达;表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白通过两步亲和层析纯化和肠激酶酶切,获得全长的PTH(1-34)-HSA融合蛋白;检测融合蛋白对UAMS-32P成骨细胞增殖活力、碱性磷酸酶活性以及RANKL和OPG基因转录水平的影响。结果重组表达质粒经测序证实构建正确;表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白相对分子质量约70 000,可与PTH抗体和HSA抗体特异性结合,发酵获得的融合蛋白的浓度为200 mg/L;纯化的融合蛋白可与抗PTH、HSA和6His标签抗体特异性结合,经肠激酶酶切后,该蛋白失去了与6His抗体反应的能力,保持了与PTH和HSA抗体结合的能力;酶切后的全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白保持了PTH的生物活性,能促进UAMS-32P成骨细胞的增殖活力,提高细胞的碱性磷酸酶的活性,上调细胞RANKL基因的转录水平以及抑制OPG基因的转录水平。结论成功在毕赤酵母中表达了全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白,有望提高PTH的成药性。 相似文献
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碱性脂肪酶在洗衣粉中稳定性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对各种碱性脂肪酶在洗衣粉中的稳定性做了系统的研究,更加全面深入地了解各种碱性脂肪酶的特性,为碱性脂肪酶在洗涤剂中的应用提供了理论依据。 相似文献
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圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达 总被引:4,自引:0,他引:4
圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的28SrRNA和18SrRNA条带。根据PG37所产碱性脂肪酶(Lip PC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在3'端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT-PCR技术扩增了Lip PC成熟肽和3'非编码区的cDNA片段,并将该PCR产物直接克隆至pUCm-T载体中。序列分析表明,Lip PC含有258个氨基酸残基,其中保守的五肽序列为Gly-His-Ser-Leu-Gly。进一步采用ClonTech公司的Smart^TM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip PC完整cDNA的分析测定。最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,SDSPAGE检测结果表明,大肠杆菌BL21所表达的GST-Lip PC融合蛋白质分子质量约为53ku。 相似文献
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目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-木聚糖酶(Xylanases,XynⅡ)融合基因。方法通过PCR技术将hLY基因与XynⅡ基因连接,中间插入肠激酶识别位点序列;将其克隆至载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-XynⅡ-EKsite-hLY,经SacⅠ线性化后,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选得到高拷贝转化子,PCR鉴定为阳性的克隆用甲醇进行诱导;表达的融合蛋白经Sephadex G-75凝胶柱层析纯化后,用肠激酶酶切,分别采用改良舒加法和DNS法测定hLY和XynⅡ的活性。结果获得的融合基因序列与理论序列完全一致;重组表达质粒构建正确;融合蛋白的hLY和XynⅡ活性分别为170和158 U/ml,经肠激酶酶切后,hLY的活性为520 U/ml,XynⅡ的活性达244 U/ml。结论已在毕赤酵母中成功表达了XynⅡ-EKsite-hLY融合基因,经肠激酶酶切后的目的蛋白活性均有较大提高。 相似文献
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对提高碱性脂肪酶硫酸铵沉淀后过滤速度进行了系统研究,采用添加定量的助滤剂和絮凝剂及不同的加入时间,获得了一条最佳的工艺路线,使过滤速度提高6倍以上,脂肪酶干粉酶活力单位在3.0×10U/g以上。 相似文献
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