甲酸脱氢酶基因在大肠杆菌Rosetta中的高效表达

甲酸脱氢酶是氧化还原酶辅酶NAD(P)~+和NAD(P)H再生循环体系中的关键酶。实验中,用PCR方法扩增了假丝酵母Candida boidinii中甲酸脱氢酶基因(fdh),分别构建了诱导型表达载体pUC-dh和pET- fdh,以E.coli Rosetta为表达宿主,获得了能够高效表达甲酸脱氢酶的重组菌。经诱导后重组菌Rosetta/pET- fdh的FDH比酶活为0.399U/mg(蛋白),Rosetta/pUC-fdh的FDH比酶活为0.163U/mg(蛋白)。经SDS- PAGE分析,Rosetta/pET-fdh和Rosetta/pUC-fdh表达的FDH蛋白分别占菌体可溶性总蛋白的17%和10%,实现了fdh基因在Rosetta中的高效表达。研究中所构建的重组菌为氧化还原反应中的辅酶再生奠定了良好的基础。     

米曲氨基酰化酶液态发酵条件的研究

通过单因素和正交试验 ,对米曲霉 3 0 42产氨基酰化酶摇瓶液态发酵条件进行优化。结果表明 ,较优培养基为 :麸皮 2 %,蛋白胨 1 5 %,玉米浆 0 5 %,酵母膏 0 1 %,KH2 PO4 0 2 %,无水MgSO4 0 1 %,吐温 80 0 0 5 %。酶活最高达到 1 2 5 8u/g(湿菌体 ) ,通过对培养条件的研究 ,最佳起始 pH 7.0、温度 2 6℃、装液量 1 0 0mL/L三角瓶。     

甘氨酸席夫碱Ni(Ⅱ)配合物法不对称合成3-甲基谷氨酸

采用甘氨酸席夫碱Ni(II)配合物法合成(2S,3S)-3-甲基谷氨酸及(2R,3R).3.甲基谷氨酸.S-2-N-(N'-苄基-S-脯氨酰)-氨基二苯甲酮-镍(II)-甘氨酸(BPB-Ni(II)-Gly)复合物在碱性条件下,与巴豆酸甲酯发生Michael加成反应.得到两种构型(2S,3S)、(2R,3R)甘氨酸席夫...     

浅谈药学实验教学改革

随着药学的飞速发展,社会需要具有创新思想和较强综合能力的复合型药学人才。我们改革传统药学实验教学模式,让学生从查阅文献开始自主确立实验方案,将药物化学、药物分析、药物制剂及药理学实验教学进行交叉、融合,设立开放性实验室,发挥学生主观能动性,让其独立思考、培养创新意识和综合能力,实现客观主义教学观向建构主义教学观的转变。     

5-(2-苯乙烯基)海因的制备研究

通过酸处理活性碳催化环氧苯乙烷制备苯乙醛,收率可达97.5%。并筛选了缩合反应催化剂,以三乙醇胺为催化剂实现了苯乙醛与海因的直接缩合。5-苯乙叉基海因收率50%。     

甘氨酸席夫碱Ni(Ⅱ)复合物法不对称合成丝氨酸

采用甘氨酸席夫碱Ni（Ⅱ）复合物法不对称合成光学纯的D-和L-丝氨酸。以2-N-（N＇-苄基）脯氨酰-氨基-二苯甲酮甘氨酸席夫碱Ni（Ⅱ）复合物与聚甲醛反应,生成2-N-（N＇-苄基）脯氨酰-氨基-二苯甲酮丝氨酸席夫碱Ni（Ⅱ）复合物,经水解生成D-或L-丝氨酸,对映体过量值（e．e．）达到98％,重结晶后e．e．为99．5％,并对手性辅基2-N-（N;-苄基）脯氨酰-氨基-二苯甲酮进行了回收,回收率为85％～95％。     

亚苄基海因水解制备苯丙酮酸的动力学

引　言苯丙酮酸是重要的医药中间体[1] ,其制备方法很多 ,主要有醋酐制备法[2 ] 、氯苄羰化合成法[3] 和亚苄基海因水解法[4 ] .其中亚苄基海因碱性水解制备苯丙酮酸是一条副产物少、水解收率高的生产路线 ,碱的种类和用量、水解温度和时间均影响着亚苄基海因的降解和苯丙酮酸的生成 ,因此 ,要获得高得率的苯丙酮酸 ,必须通过对各种影响水解动力学的因素进行研究分析 ,并建立亚苄基海因的水解动力学模型 .1　材料与方法1.1　实验试剂亚苄基海因 :工业级 ,自制 ;氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化钾等 :均为化学纯 ,南京化学试剂厂 .1.2…     

天冬氨酸转氨酶及其酶学性质

从大肠杆菌中提取了天冬氨酸转氨酶,并对其酶学性质进行了系统的研究,得出该酶的最适反应温度为３７℃、最佳反应ｐＨ范围为８．０￣８．５、最佳氨基供体为Ｌ－天冬氨酸、转化反应动力学常数Ｋｍ,地影响该酶作用的其它因素（辅酶、金属离子）作了研究。利用几种α－酮酸,考察了该酶在转化制备相应的芳香族Ｌ－氨基酸过程中的作用。为该酶的工业化应用提供了理论上的依据。     

陶瓷膜超滤在丁二酸发酵液纯化中的应用

对陶瓷膜过滤丁二酸发酵液的条件进行研究.考察在不同压差下,发酵液的pH以及浓缩倍数对膜通量的影响,并对膜清洗条件进行选择.结果表明在0.3 MPa压差下,发酵液调节pH至4.5,可获得最大膜通量,浓缩到7倍最佳.菌体截留率达到98.37%,蛋白质去除率为89.67%,总有机碳下降约40%.而膜污染后先后用1%次氯酸钠,1%氢氧化钠+0.5%EDTA清洗,可以恢复膜通量.实验表明,可以将陶瓷膜用于分离丁二酸发酵液,有利于简化操作步骤,提高生产效率.     

脱硫石膏对滨海盐渍土理化性能的影响研究

Na+等有害离子胁迫是滨海盐渍土理化性能无法得到提高的主要障碍因子之一,本文通过研究不同改良物料对消除和减轻这一障碍因子的作用性能和机理,为改良滨海盐渍土壤提供理论依据.