疏水色谱法在蛋白复性方面的应用

疏水色谱与蛋白作用温和,适用于活性蛋白的分离及复性,是色谱复性中应用较多的方法。本文对疏水色谱法的保留机制、疏水固定相中柱型、无机填料、有机填料、均一孔填料的发展以及疏水色谱法在蛋白纯化和复性方面的应用作一综述。     

红外成像系统建模仿真方法研究

建模仿真技术是一种研究、分析、设计和评价红外成像系统必不可少的关键技术。建模仿真的方法多种多样,各有特点,文中介绍了红外成像系统的基本成像过程以及现有的主要建模仿真方法,归纳了各种方法的优缺点,通过分析、比较,给出了红外成像系统建模仿真的思路和意见。     

南极磷虾氟在大鼠体内吸收代谢实验观察

目的研究南极磷虾氟在大鼠体内的吸收、分布情况。方法随机将大鼠分为8组,4组灌胃4 mL氟浓度均为0.3 mg/mL的氟化钠溶液、虾粉悬浮液、虾糜及煮沸的虾糜,在灌胃后15 min,30 min,1 h,2 h,4 h,8 h及24 h取血;另外3组连续7 d用同法给予氟化钠、虾粉、虾糜,最后一组正常喂养作为空白对照,分别取此4组大鼠的血液、肾脏、肺、心脏、肝脏和骨骼,用氟离子选择电极测氟浓度。结果大鼠连续食用南极磷虾后,肺、心脏及肝脏中氟含量无明显变化,但在血液及肾脏中均有升高,骨骼中升高尤为明显。结论大鼠连续一周大量食用南极磷虾会产生氟蓄积,蓄积的氟对机体特别是骨的影响有待进一步的研究。     

明胶海绵复合重组人骨形态发生蛋白-7植入物的体内异位成骨实验

目的: 考察以明胶海绵为载体的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)在小鼠体内异位成骨能力,评价大肠杆菌表达的rhBMP-7生物学活性。方法: 昆明种小鼠随机分为两组,将复合rhBMP-7的明胶海绵植入小鼠肌间隙作为实验组,对照组植入明胶海绵,分别于术后1、 2、3、4周取出埋植材料,HE染色进行组织学观察,测定蛋白含量、钙含量与碱性磷酸酶(ALP)活性。结果: 复合rhBMP-7的明胶海绵组在术后2、3、4周有骨细胞类似细胞和钙化灶的形成,术后2、3、4周蛋白含量、ALP活性和钙含量均明显高于明胶海绵对照组。结论: 明胶海绵复合 rhBMP-7植入小鼠体内有较强的异位成骨能力,是良好的生物载体,可用于 rhBMP-7 体内活性检测。     

多拷贝GnRH类似物的原核表达及其纯化

目的原核表达促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,Gn RH)类似物,并进行纯化。方法人工合成8拷贝Gn RH类似物基因,并利用同尾酶技术构建16拷贝的Gn RH类似物基因,将8和16拷贝串联的Gn RH类似物基因分别克隆至p GEX-2t原核表达载体上,构建Gn RH类似物基因多拷贝串联表达的重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21,利用优化后的IPTG诱导表达条件表达的重组Gn RH类似物蛋白经Glutathione Sepharose 4B柱纯化并酶解后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果质粒p GEX-2t-8Gn RH analogue和p GEX-2t-16Gn RH analogue经双酶切及测序证明构建正确。当IPTG终浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导2 h时,破菌后上清中目的蛋白表达量最高。表达的重组蛋白相对分子质量约37 000,可与兔抗Gn RH单克隆抗体特异性结合,纯化后的重组蛋白相对分子质量约1 400,蛋白浓度约260μg/ml。结论已成功构建Gn RH类似物多拷贝基因重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达,为多拷贝法生产生物活性小肽Gn RH类似物奠定了基础。     

rTNSALP-FcD10重组表达质粒的构建及在CHO-K1细胞的稳定表达

目的构建重组表达质粒pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10及p EF1-rTNSALP-FcD10,获得能够稳定表达rTNSALP-FcD10蛋白的CHO-K1细胞株。方法去除重组人非组织特异碱性磷酸酶(tissue-nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)多钛链C端氨基酸连接IgG1的Fc片段及10个天冬氨酸,构建目的基因rhALP-FcD10,将基因分别克隆至pcDNA3. 1及p EF1/Myc-His B载体上,均转化E. coli DH5α细胞;将签定正确的两组重组质粒均转染CHO-K1细胞,进行G418压力筛选,建立稳定转染的CHO-K1细胞系,采用RT-qPCR及Western blot方法检测细胞中rTNSALPFcD10 mRNA转录水平及蛋白表达量。结果重组质粒pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10及pEF1-rTNSALP-FcD10经双酶切鉴定证明构建正确;G418最低致死浓度确定为800μg/m L;CHO-K1细胞中rTNSALP-FcD10 m RNA转录及蛋白水平均高于空白对照组,差异均有统计学意义(P 0. 01);转染p EF1-rTNSALP-FcD10组的蛋白表达量较转染pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10组高。结论成功构建了rTNSALP-FcD10的重组表达质粒pcDNA3. 1-rTNSALP-FcD10及pEF1-rTNSALP-FcD10,获得了稳定转染的CHO-K1细胞系,成功表达目的蛋白rTNSALP-FcD10,为蛋白进一步纯化奠定了良好的实验基础。     

现代战争中的光电对抗技术分析

光电对抗是电子对抗的重要组成部分,其在现代战争中的地位日益提高。首先从光电侦察与反侦察、光电干扰与抗干扰两个对立面对光电对抗系统进行了分析,然后介绍了典型的光电装备及其在战争中的应用情况,最后概括了光电对抗技术及装备的发展趋势。     

云南省锻压分会举办首次锻造燃煤加热炉技术讲座

我省锻造行业使用燃煤加热炉的比例在百分之九十以上。有的厂矿由于盲目采用省外锻造炉图纸,筑炉以后大多不好用,因我省工业用煤,其煤质差,供用低发热值仅4500～5000大卡/公斤,灰分高达20～30％的煤。而省外图纸均按发热值6000大卡/公斤进行各项设计计算的,其燃烧室和加热室面积之比在50～65％。我省情况两者之比值应在85％左右为宜。根据这些特点,我会于1982年7月27日举办了一次技术讲座,参加讲座的廿多个单位近五十人。听了有关同志详细论述了     

重组人骨形态发生蛋白-7复合体对牙槽骨再生的影响

目的观察基因重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)与明胶海绵的复合体对犬牙槽骨再生的影响。方法犬拔牙创内植入rhBMP-7与明胶海绵的复合体,以自然愈合拔牙创为对照。于术后2、4、8周分别将犬处死,取拔牙创处牙槽骨标本,行X线和组织学切片检查,观察成骨情况及牙槽骨萎缩情况。结果X线及组织学切片显示实验侧成骨速度及成骨质量明显优于对照侧。结论rhBMP-7与明胶海绵复合体是一种可促进牙槽骨再生的新型生物复合材料。     

重组人成骨蛋白-1复性条件的优化

目的优化重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)包涵体蛋白的复性条件。方法将表达rhOP-1的大肠杆菌菌体在冰浴下超声裂解,分离提取包涵体,用8mol/L尿素溶解,纯化后进行梯度透析复性。利用TotalLab软件分析目的蛋白二聚体的含量,用体内法和体外法测定其生物学活性。结果经纯化后,目的蛋白纯度达97%以上。最佳复性条件为4℃,pH9.0,蛋白浓度为0.4～0.8mg/ml,尿素浓度为2mol/L,L-Arg浓度为0.4mol/L;目的蛋白复性率达75%以上,复性后蛋白具有较高的生物学活性。结论已确定了rhOP-1包涵体梯度透析复性的最佳条件。