大鼠核因子-κB 反义 RNA 腺病毒载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的: 构建表达大鼠核因子 κB(NF-κB, p65)反义 RNA 的重组腺病毒, 并测定受染血管平滑肌细胞(VSMCs) 中 NF-κB 基因的表达变化。方法: 从自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)的VSMCs 中提取总 RNA, 经 RT-PCR 方法获得含全部编码序列的NF-κB (p65) cDNA 片段(1 653 bp), 用TA 克隆技术插入 pMD18-T 载体, 构建 pMD18-T/1653 重组质粒, 并经酶切和 DNA 测序鉴定。以该质粒为模板, 经 PCR 获得 NF-κB(p65) 3' 端 269 bp 片段, 逆向插入 pcDNA3.1(+) 真核表达载体并置于CMV 启动子下。由此构建的 pcDNA3.1(+)/269 质粒含有NF-κB(p65) 的269 bp反义RNA 完整表达框。随后将该表达框克隆到入门载体 pENTR4, 构建重组质粒 pENTR4/CMV/269。使用同源重组方式在体外将该表达框重组到腺病毒载体 pAd/PL-DEST, 最终得到重组腺病毒质粒 pAd/CMV/269。线性化的重组腺病毒质粒转染 293细胞后产生的重组腺病毒颗粒用于VSMCs 的感染。Western Blot 测定感染前后VSMCs 中NF-κB(p65) 表达的变化情况。结果: 构建的pMD18-T/1653 重组质粒经过序列测定, 证实其包含大鼠NF-κB(p65) 基因的 1653 bp 片断;pcDNA3.1(+) /269、pENTR4/CMV/269、pAd/CMV/269 等重组质粒经内切酶消化或 PCR等方法鉴定无误;线性化的 pAd/CMV/269 转染 293 细胞后, 可产生完整 、具有感染性的重组腺病毒颗粒, 病毒在感染上清中的滴度 为 9.23 ×10⁹ pfu°ml^-1 (plaque form units permilliliter);Western Blot 检测证实, 感染重组腺病毒的VSMCs中的NF-κB(p65) 蛋白水平明显减少。结论: 构建了可表达大鼠 NF-κB (p65) 反义 RNA 的重组腺病毒 Ad/CMV/269, 该病毒在受染的 VSMCs 内具有下调 NF-κB (p65) 基因表达的生物学功能, 为后续的基因治疗研究奠定基础。     

基于分形孔隙模型的含天然气水合物沉积物电阻率数值模拟

电阻率法是确定天然气水合物(以下简称水合物)饱和度的重要方法,通过数值模拟可以有效研究含水合物沉积物的电阻率特性,但过去构建的孔隙模型由于约束条件较少,而与实际的孔隙结构存在着较大的差异。为此,基于自然界沉积物具有自相似特征,选定地毯总边长为3和颗粒边长为1的谢尔宾斯基地毯作为沉积物的分形孔隙模型,根据等效电阻网络模式建立了含水合物沉积物的电导模型,并利用上述模型分析了孔隙度、孔隙水电导率、沉积物骨架电导率等因素对含水合物沉积物电阻率与水合物饱和度关系的影响。研究结果表明:(1)含水合物沉积物的电阻率可以表示为孔隙度、面积比、微观结构尺寸、孔隙水电导度、沉积物骨架电导率及经验参数的函数;(2)孔隙水电导率和孔隙度的减小都会导致沉积物电阻率的增大;(3)含水合物沉积物的电阻率随水合物饱和度的增大而增大;(4)在高水合物饱和度范围内,含水合物沉积物的电阻率随沉积物颗粒骨架电导率的增大而明显减小。结论认为:在一定的水合物饱和度范围内,该分形孔隙模型计算结果与实验数据和测井数据都能较好地吻合,准确度较高。     

特高压交流试验示范工程GIS隔离开关带电操作试验

为验证我国特高压交流试验示范工程金属封闭开关设备(gas insulated switchgear,GIS)中隔离开关带电操作的安全性,在长治、南阳和荆门变电站对所有特高压GIS隔离开关进行了带电操作试验。在前期特高压GIS和复合型气体绝缘金属封闭开关设备(hypid gas insulated switchgear,HGIS)中特快速瞬态过电压(very fast transi-ent overvoltage,VFTO)实测研究基础上,开展现场典型运行方式下隔离开关带电操作,监测产生的VFTO和暂态壳体电位(transient enclosure voltage,TEV)。试验初步得出了特高压变电站实际VFTO和TEV水平及分布,结果表明:特高压GIS隔离开关的带电操作是安全的,但应注意产生的TEV对二次设备的影响,阻尼电阻能够有效抑制VFTO和TEV。带电操作试验的开展为今后特高压GIS隔离开关的带电操作提供了依据。     

一种电磁场-传输线组合的时域有限差分方法

气体绝缘开关设备(GIS)的传输结构主要由均匀传输线结构和三维非传输线结构组成,为了准确高效地计算GIS设备中开关操作产生的快速瞬态过电压(VFTO),提出了一种电磁场-传输线组合的时域有限差分方法 (3D-1D FDTD),即分别采用三维电磁场时域有限差分方法和均匀传输线时域有限差分方法对GIS设备的三维非传输线结构和均匀传输线结构进行建模和时域计算。讨论了衔接电磁场与传输线的耦合边界条件和计算迭代格式的稳定条件,并以一段GIS设备长直管母线为例,计算了不同位置的瞬态电压和瞬态电流,将计算结果与纯一维传输线等效电路模型的计算结果进行对比,验证了本文方法的有效性。     

努力提高非英语专业学生的作文能力

针对当今大学生英语写作水平不容乐观这一现实,提出了两个方面的改进措施;一、把写作教学与精读、泛读教学有机结合起来;二、按阅读→讨论→拟提纲→作文→评改→重写的实际操作方式进行写作教学     

试论文学作品翻译的局限性

通过分析话语信息的结构模式、文学翻译中文化意向的失落和歪曲等，从文化意象、语言风格等角度阐述了文学翻译的艰辛，说明文学作品的可译性不是无限的。     

基于无线模块PTR8000的智能输液控制系统设计

随着物联网技术的不断完善,无线通信技术在医疗卫生领域的应用越来越广泛.针对这一现状,设计了一种基于光电传感器技术、单片机技术及无线通信技术的智能输液控制系统.系统采用主从控制结构,分别由AT89S52单片机控制.从站实现液滴监测、步进电机对输液滴速的控制、LCD液晶屏显示及输液异常及输液完毕声光报警,并通过无线模块PTR8000实现监测数据发射功能;主站实现数据无线接收并将数据通过USB传输至PC机.     

核因子-κB在凝血酶促自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 研究凝血酶诱导培养的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖作用,探讨其引起VSMCs增殖与NF-κB途径的关系及可能机制。方法: 以0.01、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 Um/L的凝血酶与培养的VSMCs共孵育24h和用0.5 Um/L凝血酶与VSMCs分别孵育1、2、6、12、24、48h;采用WST-1代谢活性和3H-TdR掺入率测定VSMCs细胞增殖率;免疫荧光法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和0.5 Um/L凝血酶干预的VSMCs中NF-κB的细胞内定位及其核中NF-κB的蛋白含量;以已知的AngⅡ和PDGF对VSMCs的增殖作用为阳性对照,研究NF-κB途径与凝血酶诱导的VSMCs增殖关系,100 μmol/L PDTC(NF-κB特异性阻断剂)预处理后检测凝血酶引起VSMCs的增殖率。结果: 浓度为0.2～2.0 Um/L的凝血酶对VSMCs分别有明显的促增殖作用(P<0.05和P<0.01);但浓度为0.5～2.0 Um/L的凝血酶作用24h对VSMCs的促增殖作用差异无统计学意义(P>0.05)。0.5 Um/L凝血酶促VSMCs的增殖呈双峰样改变,1h和24h分别达峰值。基础状态下VSMCs的NF-κB主要分布于细胞浆,凝血酶干预后VSMCs的NF-κB主要分布于细胞核。PDTC预处理明显抑制凝血酶促VSMCs增殖的作用(P<0.01)。结论: 浓度0.2～0.5 Um/L范围内的凝血酶呈浓度依赖性方式促进培养SHR的VSMCs增殖;而且在时间上呈双峰样改变,提示凝血酶的促增殖作用存在延迟现象。凝血酶能够激活VSMCs的NF-κB,使其从细胞浆转位至细胞核。凝血酶引起VSMCs增殖与NF-κB途径有关联,NF-κB可能是VSMC增殖的细胞内信号转导的共同通路。     

我国“限塑令”的经济法律思考

我国自2008年6月正式实施限塑令以来,取得了一定成效,但并未取得预期效果。限塑令的政策制定者希望通过有偿使用塑料袋的价格导向,改变消费者的行为,使消费者用可重复使用的购物袋替代塑料袋,引     

浅谈凹版印刷发展历程

人们往往把一个国家印刷工业的整体水平看作是同它的经济、文化综合水平相关的,反映它的经济、文化水平的一个标志.这有一定道理.经济和文化原本是两个不同的社会范畴,而社会的发展正在促使着这两者水乳交融的结合.大家知道,文化属于精神范畴,它的传播在很大程度上还有赖于物质载体-印刷品,而这些印刷品大多是经济流通领域的商品.而作为经济流通领域里商品的包装装潢,则愈未愈显示出它的文化含量,包装装潢印刷正在成为印刷工业的重要组成部分.从教育方面说,中小学生用的课本,要占到印刷产量的三分之一以上.印刷工业已成为现代教育的必不可少的物质基础,一定的社会文化是社会的综合反映,而印刷工业的整体水平恰恰又是社会经济、文化、科学技术的综合反映.其中分支凹版印刷尤其突出表现历来发展历程,文本将运用事实、讲道理,具体问题具体分析的方法,研究其兴衰演变,让我们更好的认识到当今印刷业在生活中不可磨灭的分量,在你中有我,我中有你期代科学的方式中寻求发展.