HCV 2a J6JFH细胞感染模型的建立及初步应用

目的建立能够自主复制的丙型肝炎病毒(HCV)体外细胞感染模型。方法制备HCV2a FL-J6JFH和阴性对照FL-J6JFH(GND)RNA转录体,分别转染Huh-7.5细胞,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测细胞内HCV RNA水平,免疫荧光法(IFA)检测细胞内HCV蛋白的表达。以转染细胞上清液感染Na觙ve Huh-7.5细胞,检测HCV感染性病毒颗粒(HCVcc)的产生。将细胞用不同浓度的IFNα处理,观察所建立的细胞感染模型对IFNα的敏感性。结果转染后第5天,FL-J6JFH转染细胞内HCV RNA为1.2×106GE/μg RNA,第9天下降至最低水平,随后上升,于第13天达到最高值6.5×106GE/μg RNA,此后直至第59天,均保持在106GE/μg RNA左右,而FL-J6JFH(GND)转染细胞内HCV RNA则很快消失。FL-J6JFH转染的细胞内始终可以检测到HCV蛋白表达,而对照细胞内均未检测到。从第5天起,各时间点的FL-J6JFH转染细胞均能产生HCVcc。IFNα能够有效抑制HCVcc感染Huh-7.5细胞,并呈剂量依赖性。结论已成功建立了能持续产生HCVcc的HCV2a型体外细胞感染模型,IFNα能抑制FL-J6JFH HCVcc感染细胞中HCV RNA的复制,为研究HCV的结构与功能提供了实验平台。     

生命的呼唤——甘州区“7·16”重大火灾纪实

张掖市甘州区梁家墩镇梁家墩村五社村民,靠党的富民政策和自己的勤劳,再加上邻张民公路227线和城乡结合部的绝对地理优势,村民的日子日渐红火,是甘州区屈指可数的示范小康村社。为规范城镇建设,1995年以来,镇上划拨邻街每一住户长22米,宽7.5米的土地,每户投资约5.5万元,统一设计为二层邻街小楼。一楼为11.5米×7.5米的门店,前半部分商铺,后半部分中间隔墙分为宿舍和伙房,家庭式的小商小贩们就此租用经商,成为城乡结合部的繁华一条街。经后院楼梯上至二楼,一条过道两端各设约1.5平方米的卫生间和4间25平方米大小一样的住房,外来打工人员有几…     

水利工程建设中的物流外包模式浅析

物资是构成公共产品的基础,是项目成本管理的重点。物流管理已被制造业所熟知并引起广泛重视,在供应链管理思想的指导下,物流业务外包已成为许多企业降低成本改善服务的一个重要途径。     

丙型肝炎病毒JFH1 NS5A基因对HC-J4病毒复制和感染性的影响

目的探讨丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)2a FL-J6JFH NS5A基因置换对1b型HC-J4复制和感染性的影响,为建立HCV 1b细胞模型奠定基础。方法将JFH1 NS5A置换至HC-J4基因组内,构建嵌合全长基因组HC-J4/JFHNS-5A。体外制备野生型HC-J4、嵌合体及FL-J6JFH的RNA转录体,脂质体介导转染Huh-7.5细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)检测转染细胞内的蛋白表达,HCV负链RNA特异性RT-PCR法和荧光定量PCR方法(FQ-PCR)检测基因复制情况。转染后不同时间收集转染细胞上清,感染naive Huh-7.5细胞,观察其感染性。结果 IFA未观察到野生型HC-J4和嵌合体转染细胞内HCV蛋白的表达,但在转染后18 d内的各个时间点,均检测到HCV负链RNA,表明嵌合体和野生型HC-J4在转染细胞内呈低水平复制。转染后第9天和12天,FQ-PCR检测表明,嵌合体转染细胞内HCV RNA水平明显高于野生型转染的细胞(P<0.05)。不同时间点转染细胞上清感染naive Huh-7.5细胞后,IFA均未观察到表达HCV蛋白的阳性细胞。结论 JFH1 NS5A蛋白虽然在一定程度上可提高1b型HC-J4株在体外培养细胞中的复制能力,但还不足以产生能够检测到的感染性病毒颗粒。HCV 1b细胞模型的建立尚受其他因素的影响。     

网络通信在工程质量监督活动中的应用

网络通信在工程监督中的应用,改变传统监督方式,形成工程建设主体和实体全方位监督,建立预见性、服务性的质量监督模式,做到服务与执法有机结合。     

小铁山矿三维数字化模型的建立与应用

基于三维建模理论,应用3DMine矿业工程软件平台,构建了甘肃省白银矿区小铁山矿基础数据库,建立了该矿地表三维模型、1544m标高以下矿体三维实体模型、矿体块体模型、井巷开拓系统等三维模型;采用距离幂次反比法对块体模型Cu、Pb、Zn等元素品位进行赋值,对矿体各元素分别分中段、分级别进行储量计算.通过建立矿山三维数字化模型,直观展现了矿山勘探工程、矿体、井巷开拓工程等地下信息,进行储量动态管理、生产计划编制等.     

水利工程建设中的物流外包问题探析

在水利项目建设中,物资材料消耗往往占项目投资的50%以上,工程物流活动对工程项目的工期、质量、投资等目标有较大影响。因此,亟待提高工程物流管理水平。本文从分析水利工程物流特点入手,对当前行业内物流管理模式进行了分析,指出在水利工程项目建设中引入物流外包机制,引入外部有效的物流管理服务,可提高工程物流管理水平、降低工程成本。本文还对水利工程物流外包的模式及风险进行了分析。     

小铁山矿地压活动规律的分析与研究

通过对小铁山矿地压活动进行检测和分析,利用岩石力学、有限元和边界元进行应力计算,确定了该矿床的地压活动规律和构造应力场的应力分布规律。并结合实践,对现有的工程布置、结构参数和回采顺序进行优化,提出了改进措施,从而减少了因地压活动对矿山的工程布置、结构参数和回采顺序带来的危害,从而提高了矿山的施工质量,强化了矿石的开采,确保了安全生产。     

索尔库都克铜钼矿爆破方案优化

新疆索尔库都克铜钼矿,矿体为块状(整体块状)结构,倾角10°～45°,结构面间距20～100 cm或大于100 cm.目前矿山爆破方案,其炮孔的堵塞长度2 m,大于结构面间距,柱状应力波在向台阶上部表面传播过程中,遇到结构面发生反射和透射,透射应力波强度下降,当其压力值小于矿石的抗压强度时,矿石不再产生裂隙,只发生弹性...