化学发光法测定浮渣油脂类物质抗氧化活性

应用化学发光法测定甘蔗糖厂混合汁浮渣中油脂类提取物对羟基自由基(OH·)和超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力。实验结果显示,提取物清除羟基自由基的EC50为3.97μg/mL,清除超氧阴离子自由基的EC50为12.38μg/mL,表明该提取物具有较好的自由基清除能力及抗氧化活性。     

黄杆菌肝素酶Ⅰ基因的克隆与表达

目的 克隆并表达黄杆菌肝素酶I(HepI)基因.方法 通过PCR从黄杆菌基因组DNA中扩增黄杆菌HepI基因,验证后插入到表达质粒Pet-22b中构建表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白质表达,并用Azure A法测定酶活性.结果 PCR扩增得到序列正确的HepI基因,并将该基因成功插入到Pet-22b表达载体中.重组质粒转入E.coli BL21(DE3)后表达的蛋白质经SDS.PAGE分析,与目的蛋白质的相对分子质量基本一致,其活性约为50 U/LA600.结论 克隆并成功表达了黄杆菌HepI基因.     

黄杆菌肝素酶I基因的克隆与表达

目的克隆并表达黄杆菌肝素酶I(HepI)基因。方法通过PCR从黄杆菌基因组DNA中扩增黄杆菌HepI基因,验证后插入到表达质粒pET-22b中构建表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白质表达,并用Azure A法测定酶活性。结果PCR扩增得到序列正确的HepI基因,并将该基因成功插入到pET-22b表达载体中。重组质粒转入E.coli BL21(DE3)后表达的蛋白质经SDS-PAGE分析,与目的蛋白质的相对分子质量基本一致,其活性约为50 U/LA600。结论克隆并成功表达了黄杆菌HepI基因。     

重组羧肽酶原B突变体C383A的纯化与性质研究

目的 纯化羧肽酶原B突变体C383A并研究其酶学性质.方法 用DEAE-FF离子交换树脂纯化C383A,测定其动力学参数,温度对酶活性的影响、温度稳定性、最适pH以及pH稳定性等酶学性质,并与野生型比较.结果 纯化后获得高纯度突变体C383A,与野生型相比,催化效率及稳定性均有提高,但与底物的亲和力降低,随着温度的上升催化速率的增长率低于野生型.结论 将重组羧肽酶原B第383位Cys突变为Ala可对酶的性质产生影响,与野生型比较,C383A提高了酶的催化效率及温度和pH稳定性.     

重组猪胰蛋白酶冻干制剂稳定性研究及在细胞培养中的应用

目的 筛选重组猪胰蛋白酶(rPT)冻干保护剂和保存方法,及配制细胞消化液的稳定性及其应用.方法 在rPT酶液中添加不同浓度不同种类的冻干保护剂,比较冷冻干燥后的活性保留率,并从赋型性、色泽度、溶解性方面评价冻干保护剂的作用;rPT酶液经过无菌过滤处理,内毒素含量检测合格后,冻干.然后配制成细胞消化液,优化细胞消化液组成,将细胞消化液应用于细胞培养.结果 添加3％甘露醇和3％海藻糖的rPT冻干品的酶活性保留率分别为101％和86.5％;用PBS缓冲液配制细胞消化液(含有0.01％ EDTA)消化贴壁细胞的综合效果最好,且保存在-20℃时稳定性较好.结论 从冻干后酶活性保留率和冻干品外观评价,3％甘露醇可作为rPT冻干过程中的最佳保护剂;rPT细胞消化液应用在细胞培养中的成功,证明rPT可以替代提取的猪/牛胰蛋白酶使用,消除了动物源性病毒等外源因子的污染.     

80t顶底复合吹炼转炉的冶金效果

对比了包头钢铁（集团）公司炼钢厂80t顶底复合吹炼转炉和顶吹氧化转炉的冶金效果,结果表明,底吹气体对钢水的搅拌作远大于顶吹氧化。采用顶底复合吹炼工艺后,不仅钢水成分和温度更均匀,吹炼更平稳,而且钢水终点残余锰点含量提高。由于吹炼时间、氧化消耗量及炉渣中的FeO含量都有所降低,因此金属收得率提高,另外,通过适当提高炉渣碱度,该工艺还可取得较好的脱磷效果。     

重组黄杆菌肝素酶测活性方法的改进及影响因素的研究

目的提高Azure A法测活重组肝素酶的效率。方法通过缩短测定反应时间,提高酶活测定的效率。采用改进后的测活方法研究了温度、pH、盐离子浓度、不同金属离子对测活体系的影响。结果改进后的方法使肝素酶的测活效率提高了4倍,新的酶活测定方法最适反应条件为30℃,pH 7.0,盐离子浓度250 mmol/L。Cu2 对酶有轻微的激活作用,Pb2 、Mn2 则有较强的抑制作用。结论改进后的测活方法重复性好,测活效率大大提高。     

大豆异黄酮抗氧化性质的研究

目的考察大豆异黄酮的抗氧化能力。方法通过二苯代苦味酰基自由基清除实验,羟基自由基清除实验以及抗亚油酸过氧化等实验,测定和对比大豆异黄酮、维生素C和芦丁的抗氧化能力。结果大豆异黄酮对上述自由基均有清除作用,对羟基自由基的清除效果比芦丁好。结论大豆异黄酮是良好的.0H清除剂。     

重组羧肽酶B及其包涵体溶解性的研究

目的 构建重组羧肽酶B（rCPB）的表达质粒和表达菌株，表达羧肽酶B（CPB），并对表达CPB包涵体的溶解性进行研究。方法构建CPB重组质粒pET-21a—CPB，将其导入表达菌株BL21（DE3）中，分别在25℃和37℃进行诱导表达；所得包涵体分别用不同浓度尿素添加不同还原剂溶解，以溶液中的蛋白质浓度判定其溶解性，利用非还原SDS—PAGE分析其溶解性提高的原因。结果诱导后生长温度不同对rCPB包涵体的纯度及后期处理均有影响；rCPB包涵体在10mol／L尿素溶液中的溶解度比在8mol／L尿素溶液中提高2-3倍；添加0．75％β-巯基乙醇能显著改善rCPB包涵体的溶解效果。经非还原SDS—PAGE分析，添加β-巯基乙醇后，溶解rCPB聚体的含量减少。结论成功地表达了rCPB，并通过实验提高了rCPB包涵体的溶解度。     

重组羧肽酶原B突变体C383A的纯化与性质研究

目的纯化羧肽酶原B突变体C383A并研究其酶学性质。方法用DEAE-FF离子交换树脂纯化C383A,测定其动力学参数,温度对酶活性的影响、温度稳定性、最适pH以及pH稳定性等酶学性质,并与野生型比较。结果纯化后获得高纯度突变体C383A,与野生型相比,催化效率及稳定性均有提高,但与底物的亲和力降低,随着温度的上升催化速率的增长率低于野生型。结论将重组羧肽酶原B第383位Cys突变为Ala可对酶的性质产生影响,与野生型比较,C383A提高了酶的催化效率及温度和pH稳定性。