重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗与DNA疫苗免疫原性比较

目的比较重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗与DNA疫苗的免疫原性。方法用载体疫苗和DNA疫苗分别免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISPOT法检测小鼠的体液免疫和细胞免疫水平。结果两种疫苗的血清抗体水平分别为135和104 mIU/ml,百万淋巴细胞中SFC数目分别为550和314,载体疫苗均优于DNA疫苗。结论重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗较DNA疫苗具有更高的免疫原性。     

人黏蛋白1串联重复区基因真核表达载体的构建及其在动物细胞中的表达

目的构建人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)17重复序列肿瘤抗原真核表达载体,并在COS-7、HeLa和Lewis细胞中表达。方法设计1对分别含SalⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,PCR法合成1重复MUC1 VNTR片段,克隆入pGEM-Teasy载体,依据SalⅠ和XhoⅠ酶切产生相同黏性末端的特性,依次连接,构建17重复MUC1 VNTR(17m),再亚克隆至VR1012真核表达载体,构建真核表达质粒VR1012-17m。分别转染COS-7、HeLa和Lewis细胞,并进行检测。结果酶切鉴定和序列分析证实,构建的重组质粒含17m序列,经转染的COS-7、HeLa和Lewis细胞,RT-PCR检测均有17m mRNA转录,Western blot检测均有17m蛋白的表达,并与MUC1 VNTR单抗产生特异性反应。结论已成功构建17m肿瘤抗原真核表达载体,并在COS-7、HeLa和Lewis细胞中得到表达,可用于MUC1疫苗和肿瘤生物学治疗的进一步研究。     

人黏蛋白1串联重复区DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答

目的观察人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答。方法将含有33个黏蛋白1重复区序列(33m)的重组质粒pVR1012-33m,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并加强免疫2次,每次100μg,间隔2周,分别以空载体pVR1012和生理盐水为对照。末次免疫后取小鼠血清及脾淋巴细胞,Western blot检测血清抗体特异性,LDH法检测CTL反应活性,MTS/PMS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1 VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒pVR1012-33m免疫BALB/c小鼠后,在效靶比为100:1和33:1时,可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1 VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖,与空载体和生理盐水对照组相比,差异均有显著意义。结论DNA疫苗pVR1012-33m在BALB/c小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为预防、治疗性MUC1 VNTR疫苗的研制提供了一定的实验依据。     

中空纤维超滤和疏水层析大规模纯化质粒DNA

目的建立适合大规模纯化质粒DNA的工艺。方法采用碱裂解、中空纤维超滤浓缩、疏水层析、分子筛等分离技术纯化质粒DNA。结果纯化后的质粒DNA纯度达95%以上,整个工艺流程总产率为58%,各项指标均符合药用质粒DNA质量标准。结论此纯化工艺简便,产率较高,为DNA疫苗大规模纯化奠定了基础。     

铸坯模锻新工艺的效益分析

根据技术经济分析的准则，按连续铸坯，常规铸坯两种制坯方式，分别对连铸连锻，常规铸坯模锻工艺的合理性进行了分析研究。结果表明：铸坯模锻符合成本最低，利润最高，经济效益好的准则。     

铸坯模锻中的力学特征分析

在基础实验研究，理论分析，应用研究的基础上，重点对铸坯模锻变形过程吕应力状态对消除铸态组织的影响进行了较深入的分析。同时提出了铸坯模锻应力状态下合理选取锻造比的基本原则和依据。分析研究结果表明：铸坯在模锻中，力学特征有利于提高其机械性能，确保锻件质量。     

无集中供暖车库现状调查与供水安全

针对严寒地区不设置集中供暖系统地下车库建筑停车区域实测温度是否能达到5℃的问题,结合多年持续社会调查与数据收集,经数据整理及统计,分析设置集中供暖系统与不设置集中供暖系统两种情况下车库内温度差异。研究结果表明,严寒地区不设置集中供暖系统地下车库建筑,停车区域实测温度多不能达到5℃。建议严寒地区无集中供暖系统地下车库承压给排水管道应采取有效保温防冻措施。设计中应摒弃侥幸思想,保证严寒地区建筑供水系统安全。     

基于GPS驯服铷钟的频率校准系统设计

定期对GNSS接收机的外部频率源进行校准是保证定位精度的重要措施.介绍了GPS驯服铷钟频率校准系统的工作原理和硬件组成,通过频率校准实验验证了该系统达到了较好的长期频率准确度和短期频率准确度指标要求,保证了被校准频率源的精确度.     

HIV-1 Vif蛋白的体内表达及其生物学功能

目的分别构建带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因真核表达载体,在体内表达融合蛋白,并检测其生物学功能。方法PCR扩增带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因,克隆至真核表达载体VR1012上。将抗病毒因子APOBEC3G(A3G)分别与空载体VR1012、HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,检测Vif-mbp和Vif-6His的表达,并进行A3G体内降解试验。将A3G和/或可产生病毒的质粒HXB2Neo△Vif分别与HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,通过A3G包装进病毒和Magi细胞感染试验,进一步检测HIV-1Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白的生物学功能。结果重组表达质粒Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012经双酶切鉴定证明构建正确。转染293T细胞48h后,Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白均有表达,但表达的Vif-mbp有不同程度的降解。Vif-6His可降解A3G,使其表达量下降至10%左右,而Vif-mbp几乎不能降解A3G。Vif-6His可阻止A3G包装进病毒颗粒中,而Vif-mbp无此功能。Vif-mbp可使HXB2Neo△Vif病毒感染能力恢复至15%,而Vif-6His可使其恢复至86%。结论已成功构建了带有6His和mbptag的HIV-1Vif基因真核表达载体,表达的Vif-mbp融合蛋白影响了Vif的生物学功能,但Vif-6His融合蛋白不影响Vif的生物学功能。     

麦秸秆桩地基加固室内模型试验研究

麦秸秆石灰桩相对于地基土具有较高的刚度以及抗剪强度,当桩穿过地基固有的滑动圆弧时就能够阻止地基破坏弧面正常出现,阻断破坏面的形成,改变地基的破坏形式,推迟地基破坏,从而提高地基的承载力。成桩过程中由于桩锤的冲击会使桩孔膨胀,对周围的土体产生膨胀挤密作用,使周围土体更加密实,这有效的提高了软粘土地基的承载力,桩排数的增加又会使桩的整体性提高,进一步提高了地基的承载力