芒果过敏的研究进展

芒果是世界范围内广泛栽培的热带水果,其所含有的过敏原可能危及人体健康。本文对芒果过敏的临床症状、流行情况、芒果过敏原及芒果过敏原与其他过敏原之间交叉反应的研究进展进行了综述。     

花生主要过敏原Ara h1的纯化

采用硫酸铵沉淀及凝胶过滤层析方法,纯化花生主要过敏原蛋白Ara h1,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合免疫印迹实验(Western-Blotting)进行鉴定。结果表明：可纯化出纯度90%以上的Ara h1过敏原蛋白。     

牛奶过敏原的分离、鉴定与纯化

对牛奶过敏原进行分离、鉴定与纯化。通过SDS-PAGE电泳分离牛奶的蛋白质组份,采用免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对牛奶过敏原进行初步纯化。结果表明,鲜牛奶粗提液SDS-PAGE显示蛋白条带有12条,奶粉粗提液SDS-PAGE显示出的蛋白条带与鲜牛奶的蛋白条带基本一致。鲜牛奶Western-Blotting显示14ku的阳性条带。离子交换层析可初步纯化出14ku的过敏原蛋白。本研究对牛奶过敏原进行了分离和鉴定,并初步纯化出牛奶的主要过敏原。     

鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因的克降、表达、纯化及免疫学鉴定

目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因并柃验其免疫活性.方法:提取鸡蛋的总RNA,采用RT-PCR方法扩增出目的基因片段,将其克隆入T载体中进行测序和分析.设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中进行诱导表达.通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE结合活性.结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3.基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸.该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000.表达产物经亲和层析纯化,用Western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性.结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性.     

时间分辨免疫荧光法测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分

目的:建立双抗体夹心时间分辨免疫荧光法(TRFIA)用于测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分,为进出口食品鸡蛋过敏原成分检测提供技术基础.方法:提取鸡蛋过敏原总蛋白,免疫小鼠获得多克隆抗体,并以此抗体包被酶标板,采用生物素标记抗鸡蛋过敏原总蛋白抗体、Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,用于检测10种食品中是否舍有鸡蛋蛋白成分.结果:鸡蛋总蛋白SDS-PAGE显示带大致有10条,其中主要条带有4条,分子量分别为71、55、38、14kDa;成功地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为0.625ng/mL,标准曲线在12.5～640ng/mL范围内线性良好;8种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性.结论:初步建立了检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分的双抗体夹心TRFIA,具有较好的特异性和灵敏度;该方法对于未标注鸡蛋过敏原成分的食品检测具有一定的实际应用价值.     

金线莲苷促进骨骼肌细胞摄取葡萄糖的分子机制研究

在本研究中,先诱导大鼠骨骼肌细胞分化为成熟的肌管细胞,然后以肌管细胞为模型,在胰岛素敏感和胰岛素抵抗的情况下,通过蛋白免疫印迹的方法检测金线莲苷对蛋白激酶Akt和AMPK的活化,以荧光标记的2-脱氧葡萄糖为能量底物检测金线莲苷处理前后细胞对葡萄糖的摄取。结果显示在正常细胞中,10 nM金线莲苷作用24 h可显著增加Akt(34.53%,p0.05)和AMPK的活性(149.92%,p0.05),同时促进细胞对葡萄糖的摄取(43.35%,p0.05)。在胰岛素抵抗的细胞中,金线莲苷对AMPK的活化不受影响,并且可改善胰岛素对Akt的激活作用(79.05%,p0.05)。在正常及胰岛素抵抗的情况下,金线莲苷对胰岛素诱导的葡萄糖摄取都具有协同作用。这些结果表明金线莲苷可通过调控Akt和AMPK的活性改善细胞胰岛素抵抗,促进胰岛素抵抗细胞对葡萄糖的摄取。