豆渣蛋白肽的酶解工艺、抗氧化作用及其特性研究

以豆渣蛋白为原料、对DPPH·清除率为考察指标,从胰蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶中筛出中性蛋白酶为最佳水解酶;利用单因素和正交试验探讨豆渣蛋白肽的最佳制备工艺;以抗坏血酸(VC)为对照,研究豆渣蛋白肽的总还原力、对·OH、O·-2的清除作用及对脂质过氧化的抑制作用;研究豆渣蛋白肽的部分特性。结果表明,豆渣蛋白肽的最佳制备工艺为:pH 7,温度70℃,豆渣蛋白浓度4 mg/mL及酶量100 U。VC和豆渣蛋白肽对·OH的半数抑制浓度(IC50)分别为0.274和0.046 mg/mL;对O·-2的IC50分别为0.026和0.084 mg/mL;VC和豆渣蛋白肽的总还原力与其浓度呈剂量依赖关系,且对脂质过氧化有一定抑制能力。豆渣蛋白肽等电点约为3.0,在pH 3~12范围内,其提取率逐渐增加。     

3种不同溶剂中根皮苷与牛血红蛋白的相互作用及抗氧化性

在dH₂O、10% DMSO和10% EtOH溶剂体系中,利用紫外光谱、荧光光谱、同步荧光光谱和红外光谱法及对DPPH和ABTS自由基清除法,研究牛血红蛋白与根皮苷的相互作用及对根皮苷抗氧化性的影响。结果表明:在3种不同溶剂体系中,随根皮苷浓度的不断增加,其对牛血红蛋白的荧光猝灭均逐渐增强,猝灭机理均为静态猝灭和非辐射能量转移,相互作用力以范德华力和氢键为主,根皮苷与牛血红蛋白的结合位点更接近Trp残基。在dH₂O体系中,酰胺Ⅰ带和Ⅱ带发生轻微红移。除10% EtOH-DPPH体系外,根皮苷-牛血红蛋白均增加了根皮苷对DPPH和ABTS自由基的清除率。该研究表明,溶剂极性可不同程度影响根皮苷与牛血红蛋白的相互作用和抗氧化性。     

莴笋多酚氧化酶、过氧化物酶的特性及抑制作用研究

采用分光光度法测定莴笋多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）的活性,研究酶的稳定性、温度、p H、底物浓度及几种抑制剂对其活性的影响,建立相应酶促动力学方程,利用正交实验探讨最佳抑制条件。结果表明,PPO和POD最适温度分别为50℃和40℃,最适p H分别为6.0和6.5,随温度不断升高,PPO和POD活性逐渐下降。动力学方程分别为V=342.566[S]/（5.9×10-3+[S]）和V=3403.008[S]/（6.88×10-4+[S]）。对PPO抑制强弱为:VC>L-Cys>Na HSO3>柠檬酸>EDTA>苯甲酸>琥珀酸,对POD抑制强弱为:EDTA>VC>L-Cys>柠檬酸>Na HSO3>琥珀酸>苯甲酸。正交实验表明,对PPO最佳抑制条件为:Na HSO39mmol/L、L-Cys 5mmol/L及VC5mmol/L。对POD最佳抑制条件为:VC0.2mmol/L、EDTA 0.2mmol/L及L-Cys 1.4mmol/L。      

大扁杏杏仁油的脂肪酸分析

采用索氏提取法对大扁杏杏仁中油脂进行提取,并将油脂用饱和氢氧化钾-甲醇皂化,再用甲醇-硫酸（体积比为4∶1）甲酯化后,将乙醚萃取液作气相色谱-质谱联用仪分析。结果表明,大扁杏杏仁的出油率为51.2%,脂肪酸组分主要为油酸（77.08%）,亚油酸（6.12%）,棕榈酸（7.12%）,亚麻酸（3.44%）,硬脂酸（1.36%）等,其中不饱和脂肪酸占86.64%。      

蒽酮－硫酸比色法测定乌龙茶多糖的条件研究

本文对蒽酮-硫酸比色法测定乌龙茶多糖含量的条件进行了探讨。结果表明,最优条件为：蒽酮浓度为0．2％,样液与显色剂体积比为1：3,沸水浴10min。该方法简便易行,准确性高,重现性好。     

应用AdMax系统构建携带HCV核心基因Core的重组腺病毒载体

目的应用AdMax系统构建携带丙型肝炎病毒(HCV)核心基因Core的重组腺病毒载体,为进一步研究防止HCV感染的基因疫苗和基因治疗奠定基础。方法RT-PCR法从丙型肝炎患者血清中扩增HCVCore基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-Core,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pAd-Core,经HEK293细胞扩增后,离子交换柱层析法纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度,并计算比活性及单细胞产量。结果重组腺病毒pAd-Core感染的HEK293细胞经PCR检测,可扩增出HCV核心基因Core片段,经测序证明,其插入序列与设计的HCV Core基因序列一致。扩增纯化后,重组腺病毒的比活性达0.034IU/VP,单细胞产量可达2.63×104VP/细胞。结论已成功构建重组腺病毒载体pAd-Core,为Core基因在腺病毒介导下的基因免疫和基因治疗的研究奠定了基础。     

山药多酚氧化酶的特性和抑制研究

以邻苯二酚为底物,410nm处测定山药多酚氧化酶(PPO)的活性,研究了pH、温度、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对山药多酚氧化酶活性的影响。结果表明,山药PPO最适反应pH为6.5,最适反应温度为40℃;柠檬酸、草酸、L-抗坏血酸、亚硫酸氢钠及半胱氨酸五种抑制剂对山药PPO均有抑制作用,其强弱依次为:L-半胱氨酸>抗坏血酸>草酸>柠檬酸>亚硫酸氢钠;硫酸铜和三氯化铁均有加速酶促褐变作用,强弱为CuSO_4>FeCl_3。     

罗望子多糖硫酸酯的制备及表征

利用水提醇沉、Sevage法及木瓜蛋白酶法从食品级的罗望子胶中分离、纯化罗望子多糖,得到的罗望子多糖纯度为92.7%。采用氯磺酸-吡啶法合成罗望子多糖硫酸酯,元素分析法测得其取代度为1.4;红外表征发现硫在合成产物中以S=O双键和C-O-S形式存在。      

罗望子多糖硫酸酯的制备及表征

利用水提醇沉、Sevage法及木瓜蛋白酶法从食品级的罗望子胶中分离、纯化罗望子多糖,得到的罗望子多糖纯度为92.7%。采用氯磺酸-吡啶法合成罗望子多糖硫酸酯,元素分析法测得其取代度为1.4;红外表征发现硫在合成产物中以S=O双键和C-O-S形式存在。     

大孔吸附树脂纯化乳苣多酚的研究

通过吸附和解吸附实验筛选适合乳苣多酚纯化的大孔吸附树脂并确定其最佳工艺。结果表明:D-101为乳苣多酚纯化的最佳树脂,在150min内达到吸附平衡,120min内解吸附平衡。最佳上样浓度为0.2mg·mL-1,pH4,解吸剂浓度为60%乙醇,洗脱速率为0.5mL·min-1,洗脱体积为3BV。紫外吸收表明纯化后乳苣多酚纯度得到提高。结果说明,D-101可用于乳苣多酚进一步纯化。