中国魔芋资源研究及其在食品中的应用

中国魔芋资源十分丰富,有２１ 个品种,花魔芋和白魔芋等种葡甘聚糖含量高,经济价值大。魔芋葡甘聚糖加工以“干法”为主,但正向提高纯度、透明度、溶胀速度方向发展。魔芋葡甘聚糖溶胶为假塑性液体,粘度高,并与某些物质协同增稠。在碱性加热条件下可形成热不可逆凝胶;与黄原胶等可协同形成热可逆凝胶。魔芋葡甘聚糖具有降血脂、降血糖、减肥、通便等保健作用。利用上述性质和保健功能,可开发生产多种凝胶类食品或保健食品,添加到其它食品中,提高产品质量。魔芋的开发应用具有较大潜力。     

魔芋葡甘聚糖的结构、食品学性质及保健功能

综述了国内外关于魔芋葡甘聚糖的化学结构、食品学性质、保健功能及在食品与医药中的应用。     

原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究

目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鏊定重组抗体特性.方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体.以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性.超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白.通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western bloning和间接竞争EUSA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定.结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%.以1 mol/L尿素洗涤包涵体,6 mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%.Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应.间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35 ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应.结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础.     

沙丁胺醇人工抗原合成及鉴定研究

用琥珀酸酐将沙丁胺醇活化后制备出半抗原沙丁胺醇半琥珀酸,经电喷雾电离质谱(ESI-MS)、红外光谱(IR)和核磁共振(1H-NMR)鉴定合成成功,同时证实琥珀酸酐连结在沙丁胺醇乙醇胺的羟基处,且半抗原以内胺盐形式存在。用混合酸酐、活泼酯方法将沙丁胺醇琥珀半酸分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,经紫外吸收法鉴定偶联成功,偶联比分别为12.8:1、23:1。本研究为进一步制备沙丁胺醇抗体奠定了基础。     

DNA染料结合环介导等温扩增技术检测志贺氏菌死活细胞

建立了一种DNA染料（EMA）结合环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）的分析方法（EMA-LAMP）,用于有效检测区分病原微生物志贺氏菌的死活细胞。基于志贺氏菌ipaH基因的六个区域设计特异性的引物,检测志贺氏菌的死活细胞。结果表明:浓度为40μg/mL的EMA能够有效抑制109CFU/mL的死细胞扩增,而对相同浓度的活菌扩增没有影响。分析表明,该方法可以有效区分细菌的死活细胞,克服了传统PCR无法区分死活细胞的弊端,同时EMA-LAMP检测方法耗时短,检测灵敏度高,是一种能够有效鉴别病原菌死活细胞的新方法。      

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

制备抗沙丁胺醇单克隆抗体,鉴定其特异性并建立间接竞争ELISA检测方法。以合成的沙丁胺醇完全抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选克隆得到稳定分泌抗沙丁胺醇抗体的单克隆杂交瘤细胞,命名为4E4和3A2。经鉴定,两个抗体亚类都为IgG1,其腹水纯化后效价分别达到2·56×105和1·28×105。以效价高且特异性较好的4E4细胞株获得的抗体建立间接竞争ELISA方法,经条件优化后得到标准曲线,检测范围为4·76~84·99ng/mL,IC50为20·12ng/mL,检测限为3·25ng/mL,与克伦特罗交叉反应率为253·62%,与其它结构类似物没有明显交叉反应。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接ELISA方法,可用于开发同时检测沙丁胺醇和克伦特罗的试剂盒。      

呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

为了建立检测呋喃西林代谢物（SEM）的酶联免疫吸附分析方法（ELISA）,将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度（IC50）为12.37ng/mL;定量检测线性范围（IC20～IC80）为0.439～110.78ng/mL;检测限（IC10）达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。      

拟除虫菊酯类农药及其代谢物免疫检测技术研究进展

拟除虫菊酯类农药是一类在世界范围内被广泛用于防治害虫的神经毒剂.由于用量大且存在一定毒性,因此,研究适合现场快速检测的筛查方法对于保障消费者身心健康具有重要作用.基于抗体特异性识别的免疫分析法具有简便、灵敏、快速及低成本等特点,是当前食品安全主流快速检测方法.该文重点介绍了拟除虫菊酯类农药及其代谢物半抗原设计策略、抗体...     

抗克伦特罗单链抗体基因工程菌株发醇条件的研究

重组大肠杆菌BL21携带抗克伦特罗单链抗体(seFv)基因,研究了不同培养基、诱导时期、诱导时间、初始pH以及装液量对重组抗体表达量的影响,并对重组质粒稳定性进行研究.结果表明,在初始pH为7.2、装液量为25mL/250mL的LB培养基中,30℃培养菌体生长至A60onm为0.8时,42℃诱导表达6h,scFv表达量可达33.7%.工程菌在无选择压力条件下连续传代120代,保持稳定,100%的菌株携带重组质粒且经诱导后均有重组抗体的表达.     

魔芋胶对大豆分离蛋白乳化性的影响研究

以魔芋胶（KG)与大豆分离蛋白（SPI）作为基材，研究KG对SPI乳化性的影响。比较KG、黄原胶（XG)、瓜尔豆胶（GG）三者对SPI乳化性的影响，结果表明KG对SPI乳化性的提高作用强于XG和GG。随KG的添加，复合体系乳化性明显增强。0.50%SPI-0.05%KG复合体系乳化性受pH的影响与单独SPI相比，较为稳定。NaCl的添加，对复合体系乳化性影响显著，温度对复合体系乳化性影响较小。