基于光谱法研究异细交链孢菌酮酸半抗原-抗体的相互作用

本文采用紫外可见光谱(UV-Vis)、荧光光谱和圆二色谱(CD)技术研究了异细交链孢菌酮酸单克隆抗体(Mc Ab)与其半抗原(Ite AH)之间的相互作用并用ELISA方法对荧光结果进行了验证。结果表明,ITe AH对Mc Ab有荧光猝灭作用,淬灭机理主要为静态猝灭且遵循非辐射能量转移理论。在298、310、318 K 3个温度下,ITe AH与Mc Ab的结合常数分别为1.9×106、1.6×106、1.4×106 L/mo L,结合位点数n≈1,结合距离r为3.35 nm,经ELISA测得的结合常数与荧光分析的结果较一致。由结合作用过程的热力学参数可知,两者之间以静电引力为主要作用力,不同p H下,由ELISA结果可推测其影响了ITe AH与抗体结合。同步荧光光谱显示ITe AH的加入并未使抗体的酪氨酸和色氨酸残基附近的微环境发生明显改变,两者的结合位点更倾向于酪氨酸残基,圆二色谱分析发现ITe AH与Mc Ab相互作用后,抗体的二级结构发生明显变化。     

可食性魔芋葡甘聚糖热水溶性复合膜的制备及性能研究(Ⅱ)

本文以魔芋胶(KG)和卡拉胶为基材,利用KG与卡拉胶存在协同效应,制备热水溶性膜,采用均匀正交设计表进行试验设计,研究了温度、石蜡、魔芋胶与卡拉胶的比例、乳化剂和聚乙二醇400对热水溶性膜抗张强度(TS)和伸长率(E)的影响,得到相应单指标二次回归模型。模型分析表明:5个因素的一次项,二次项及交互项对膜的性能也有不同程度的影响。并得出了各因子对膜性能的影响规律。     

呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

为了建立检测呋喃西林代谢物（SEM）的酶联免疫吸附分析方法（ELISA）,将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度（IC50）为12.37ng/mL;定量检测线性范围（IC20～IC80）为0.439～110.78ng/mL;检测限（IC10）达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。      

DNA染料结合环介导等温扩增技术检测志贺氏菌死活细胞

建立了一种DNA染料（EMA）结合环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）的分析方法（EMA-LAMP）,用于有效检测区分病原微生物志贺氏菌的死活细胞。基于志贺氏菌ipaH基因的六个区域设计特异性的引物,检测志贺氏菌的死活细胞。结果表明:浓度为40μg/mL的EMA能够有效抑制109CFU/mL的死细胞扩增,而对相同浓度的活菌扩增没有影响。分析表明,该方法可以有效区分细菌的死活细胞,克服了传统PCR无法区分死活细胞的弊端,同时EMA-LAMP检测方法耗时短,检测灵敏度高,是一种能够有效鉴别病原菌死活细胞的新方法。      

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

制备抗沙丁胺醇单克隆抗体,鉴定其特异性并建立间接竞争ELISA检测方法。以合成的沙丁胺醇完全抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选克隆得到稳定分泌抗沙丁胺醇抗体的单克隆杂交瘤细胞,命名为4E4和3A2。经鉴定,两个抗体亚类都为IgG1,其腹水纯化后效价分别达到2·56×105和1·28×105。以效价高且特异性较好的4E4细胞株获得的抗体建立间接竞争ELISA方法,经条件优化后得到标准曲线,检测范围为4·76~84·99ng/mL,IC50为20·12ng/mL,检测限为3·25ng/mL,与克伦特罗交叉反应率为253·62%,与其它结构类似物没有明显交叉反应。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接ELISA方法,可用于开发同时检测沙丁胺醇和克伦特罗的试剂盒。      

食品中痕量丙烯酰胺检测方法研究进展

丙烯酰胺广泛存在于各类加工食品中,特别是高温加工淀粉类食品、早餐谷类食品或咖啡及其制品等。但是,由于其具有神经和生殖毒性,已被国际肿瘤机构列为2A类致癌物。因此,加强对食品中丙烯酰胺的检测,特别是在食品加工生产线上进行现场或在线监测十分必要。本文主要介绍了目前用于丙烯酰胺按检测的各种方法,主要包括实验室常规检测方法如气相色谱、液相色谱及毛细管电泳,以及有望进行现场或在线监测的检测方法如生物传感器法和免疫分析法等,并对各种方法的优缺点进行评述。      

γ-氨基丁酸对DEHP染毒大鼠焦虑行为的干预研究

目的:研究γ-氨基丁酸（GABA）对邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）染毒大鼠焦虑行为的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组（C）、DEHP组（500 mg/kg）、GABA低、中、高剂量干预组（L组:500 mg/kg DEHP+1 mg/kg GABA、M组:500 mg/kg DEHP+2 mg/kg GABA、H组:500 mg/kg DEHP+4 mg/kg GABA）,连续干预30 d。利用高架十字迷宫（EPM）测定干预前后大鼠行为变化,随后测定大鼠额叶皮质五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）的水平。结果:干预前各组大鼠EPM指标无显著性差异（p>0.05）;干预后H组和C组总食物利用率显著高于DEHP组（p<0.05）;干预后各组大鼠入臂总次数无显著性差异（p>0.05）,DEHP组大鼠开臂时间百分比、开臂次数百分比均极显著低于对照组（p<0.01）,M组和H组开臂时间百分比及开臂次数百分比均显著高于DEHP组（p<0.05）;DEHP组5-HT和NE均显著高于C组（p<0.05）,M组5-HT及NE均显著低于DEHP组（p<0.05）,H组5-HT及NE均极显著低于DEHP组（p<0.01）。结论:DEHP可能通过升高额叶皮质5-HT、NE水平造成大鼠焦虑,GABA可以通过降低额叶皮质5-HT、NE水平起到改善焦虑的作用。      

基于QuEChERS前处理技术的水产品中喹诺酮类药物多残留ELISA检测方法的建立

建立了水产品中3种喹诺酮类(恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星)兽药多残留的新型Qu ECh ERS前处理技术结合酶联免疫快速检测的分析方法。基本流程为样品经90%乙腈(1%乙酸)均质提取离心后,上清液依次用C18净化、静置沉淀蛋白后用于测定,该前处理方法灵敏、快速、经济、实用性强。测试曲线线性范围为0.107~177.896ng/m L,检出限为0.0087μg/kg,IC50值为4.34ng/m L。样品批内和批间平均回收率分别为94.10%、93.70%,批内变异系数为4.09%~8.41%,批间变异系数2.78%~7.99%。检测结果与HPLC的相关系数R2=0.9897,表明酶联免疫检测方法及样品前处理方法适合喹诺酮类药物多残留检测。      

苯甲酸免疫胶体金快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,制备苯甲酸胶体金免疫层析快速检测试纸条,采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒直径为17nm的胶体金,将苯甲酸金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上制成胶体金结合垫,将包被抗原和二抗羊抗兔分别结合于硝酸纤维膜作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成胶体金免疫层析试纸条并进行灵敏度测试。结果显示,胶体金试纸条检测限为100μg/L,可在5～7min内完成测试,与苯酚、甲苯、苯乙酸、苯丙氨酸等药物均无交叉反应,检测结果与酶联免疫吸附法完全一致。该方法具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高等特点,适用于现场快速检测和筛选工作,具有广泛的商业开发应用前景。      

我国居民膳食营养状况与《中国食物与营养发展纲要(2014年-2020年)》相关目标的比较分析

目的：对江门市2016~2020年蔬菜食品安全抽检数据进行分析,建立基于数据挖掘的食品风险预测模型。方法：以江门市辖区内农贸市场、批发市场、商场超市、餐饮服务单位等单位10个种类的蔬菜样本共1928份,分析其不合格样本和不合格项目的分布情况,并基于监测指标和样本信息,选取蔬菜种类、蔬菜品种、监测场所等7个属性为输入,结论属性为输出,利用反向传播（back-propagation,BP）神经网络构建蔬菜食品安全风险分析与预测模型。结果：风险分析显示,江门市芽菜类蔬菜、叶菜类蔬菜、根茎类和薯类蔬菜合格率分别为81.7%、95.9%、96.3%,均低于总体合格率96.6%;4-氯苯氧乙酸钠、毒死蜱和铅元素超标问题突出,不合格批次占比达71.2%。经数据处理、最优参数筛选、数据训练和验证、模型优化等步骤构建出3层的BP神经网络模型,该模型总体精度为96.3%,灵敏度为96.8%,特异性为83.9%。结论：该模型具有良好的预测准确度和性能,可为食品安全监管工作提供技术参考。建议可利用快检技术的大数据量优势与BP神经网络相结合,构建多算法组合模型,并加强样品信息登记的规范性,以构建出准确度更高,应用更广的风险分析与预测模型。