原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究

目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鏊定重组抗体特性.方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体.以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性.超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白.通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western bloning和间接竞争EUSA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定.结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%.以1 mol/L尿素洗涤包涵体,6 mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%.Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应.间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35 ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应.结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础.     

沙丁胺醇人工抗原合成及鉴定研究

用琥珀酸酐将沙丁胺醇活化后制备出半抗原沙丁胺醇半琥珀酸,经电喷雾电离质谱(ESI-MS)、红外光谱(IR)和核磁共振(1H-NMR)鉴定合成成功,同时证实琥珀酸酐连结在沙丁胺醇乙醇胺的羟基处,且半抗原以内胺盐形式存在。用混合酸酐、活泼酯方法将沙丁胺醇琥珀半酸分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,经紫外吸收法鉴定偶联成功,偶联比分别为12.8:1、23:1。本研究为进一步制备沙丁胺醇抗体奠定了基础。     

保健食品中西地那非检测方法的研究进展

枸橼酸西地那非作为一种特异性磷酸二酯酶5型抑制剂, 常被非法应用于保健食品中。由于西地那非毒副作用大及滥用问题突出, 研究其检测方法十分必要。目前已报道的西地那非检测的方法主要有分光光度法、色谱法、光谱法、毛细管电泳以及免疫分析法, 但这些方法各有利弊。本文针对当前保健食品中西地那非检测方法作了综述, 以期为该类食品的安全检测提供方法学思路。     

丝网印刷生物传感器在食品分析中的应用

丝网印刷生物传感器因其成本低,耗时短,微型化等优点,近年来在食品分析领域得到广泛应用.本文对丝网印刷电极的原理、制作过程进行了介绍,并综述了丝网印刷生物传感器在食品分析领域的研究进展,探讨了其在食品分析领域的应用前景.     

化学发光免疫分析技术及其在食品安全检测中的研究进展

近年来, 化学发光免疫分析因其具有特异性强、灵敏度高、线性范围宽、仪器简单、操作方便、无放射性污染等优点越来越受到人们的关注。本文简要介绍了化学发光免疫分析的类型及其原理, 根据化学发光体系中标记物质的不同以及检测体系的差别, 对化学发光免疫分析技术进行了系统的分类, 并且对各种方法进行了详细的介绍, 对其优点和不足做了透彻的分析。对该分析方法在食品安全检测中的运用, 包括检测食品中微生物、毒素、农药残留、兽药残留等进行了综述, 并展望其发展方向。     

可食性魔芋葡甘聚糖热水溶性复合膜的制备及性能研究(Ⅲ)

本文以魔芋胶(KG)即魔芋葡甘聚糖(KGM)和卡拉胶为基材,利用KG与卡拉胶存在协同效应,制备热水溶性可食膜,采用均匀正交设计表进行试验设计,研究了温度、石蜡、魔芋胶与卡拉胶的比例、乳化剂和聚乙二醇400对热水溶性膜水蒸气透过系数(WVP)、耐破度(BS)、抗张强度(TS)和伸长率(E)的影响,采用主成分几何平均分析法对试验结果进行多指标分析,获得了使该膜综合性能优良的组合因素与水平,即:干燥温度37℃;石蜡用量3.761g/L;魔芋胶与卡拉胶的比值为1.298;乳化剂用量2.914g/L;PEG-400用量3.375ml/L。     

基于RBF的人工神经网络在PCB钻孔工艺中的应用

本文简要介绍了PCB行业中钻孔工艺的偏移问题以及RBF网络的特点与原理,着重介绍了应用RBF网络进行钻孔偏移分析及改善的优化模型、网络训练过程等,仿真测试结果表明其能较好地提高钻孔精度。     

保健型话梅润喉片的研制

研究了用湿颗粒法生产保健型话梅润喉片的配方和一些影响产品质量的工艺参数.结果表明,润湿剂的浓度、几种主要原料的用量、干燥终点等对保健型话梅润喉片的质量有较大的影响.当以50%乙醇作润湿剂,以25%话梅粉、30%蔗糖、20.5%葡萄糖、20.5%低聚异麦芽糖(IM0900)和4%柠檬酸为原料,再添加上述混合料总量的0.5%话梅香精、0.1%薄荷脑和0.5%硬酯酸镁,可制得口感好、有浓郁话梅风味、表面光滑美观、硬度好、润喉和具保健功能的保健型话梅润喉片.     

魔芋葡甘露聚糖通过肠道菌群-胆汁酸途径发挥降脂作用

建立高脂饮食诱导金黄地鼠血脂紊乱模型,从肠道菌群和胆汁酸代谢关系角度探究魔芋葡甘露聚糖（konjac glucomannan,KGM）降脂机理。5 周龄地鼠随机分为Control组、高脂饮食（high fat diet,HFD）组、2%（质量分数,下同）KGM组、6% KGM组和10% KGM组,干预5 周后测定血清和肝脏脂质水平,并分析KGM对肠道菌群及其代谢物胆汁酸代谢的影响。结果表明,6%和10% KGM干预可显著降低血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）浓度以及肝脏中TC浓度。HFD组分别与Control组、KGM组比较后共筛选出51 种差异代谢物,经类别富集分析后发现,胆汁酸类物质种类在所有代谢物类别中占比最高（24%）。此外,京都基因与基因组百科全书代谢物通路富集分析显示初级胆汁酸合成代谢途径存在差异。盲肠内容物肠道菌群分析及胆汁酸测定结果表明,6%和10% KGM干预后嗜胆菌属（Bilophila）以及具有胆盐水解酶（bile salt hydrolase,BSH）活力的双歧杆菌属（Bifidobacterium）和乳杆菌属（Lactobacillus）相对丰度显著下降,且脱氧胆酸（deoxycholic acid,DCA）和石胆酸（lithocholic acid,LCA）含量降低。此外,在6% KGM干预组中,肝脏中胆汁酸合成关键酶胆固醇7α-羟化酶（cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1）的基因表达上调。综上,KGM可通过降低具有BSH活力的肠道菌群和嗜胆菌属相对丰度及上调CYP7A1基因表达调节机体胆汁酸水平,从而改善机体脂质代谢紊乱。     

食品中16种邻苯二甲酸酯类塑化剂的GC-MS检测方法研究

建立了同时测定不同类别食品中16种邻苯二甲酸酯类塑化剂的气相色谱-质谱(GC-MS)分析方法。对各种类别的食品采取不同的分离、净化方法;含油类样品经正己烷提取后,提取液用GPC凝胶色谱仪进行净化;采用GC EI/MS的选择离子检测方式(SIM)进行定性和定量分析。16种邻苯二甲酸酯的质量浓度在0.02~5 mg/L范围内呈良好线性,相关系数不低于0.999,检出限(S/N=3)为0.02 mg/kg。在0.4~2 mg/kg加标水平下的该方法回收率为75%~115%,相对标准偏差(RSD,n=3)为1.00%~10%。