雌二醇间接竞争酶联免疫吸附方法的建立

建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明：IC50为3.9ng/mL,检测限为0.3ng/mL,交叉反应率均小于1.21%。检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中雌二醇检测试剂盒的研制。     

鱼用麻醉剂安全性研究进展

鱼用麻醉剂能有效降低鱼类长途运输过程中的伤亡率,已在某些国家渔业生产中广泛应用,但其残留及安全性问题一直受到关注。目前有关鱼用麻醉剂的综述很少,为此本文对鱼用麻醉剂的类别、毒理学研究结果、麻醉剂在鱼体中积累与净化的影响因素等进行了综述,并对我国鱼用麻醉剂的使用和管理提出了部分建议。     

抗孔雀石绿单链抗体-碱性磷酸酶融合表达和活性鉴定

采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿（malachite green,MG）单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接,形成单链抗体（single chain variable fragment,scFv）基因,并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,PhoA）基因的载体plip6/GN中,成功构建重组质粒plip6/GN-MG-scFv。随后重组质粒转入大肠杆菌BL21,经诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting鉴定结果表明所获得的融合蛋白scFv-PhoA大小约72 kD。利用scFv与MG特异性结合的活性和PhoA催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制,经过直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL。本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短,这为进一步进行MG免疫法快速检测提供了参考。     

辐照处理对魔芋葡甘聚糖肠道益生作用的影响

为探究辐照改性技术对魔芋葡甘聚糖（konjac glucomannan,KGM）肠道益生性的影响,以60Co为辐射 源制备0、10、20、30 kGy辐照剂量的KGM样品,采用健康志愿者粪便体外厌氧发酵,比较不同辐照剂量KGM 体外发酵液pH值、短链脂肪酸含量、有益菌及有害菌数目、双歧杆菌数量/大肠杆菌数量（B/E值）、益生元指数 （prebiotic index,PI）的差异。结果表明：相对于葡萄糖阳性对照,不同辐照剂量KGM均能有效降低发酵液pH 值,维持酸性环境,促进短链脂肪酸生成,同时改善发酵液微生物构成,提高B/E值及PI。在0～30 kGy辐照范围 内,随辐照剂量增大,KGM发酵液短链脂肪酸生成量增加,PI升高,0、10、20、30 kGy KGM的PI分别为0.48、 0.61、0.76、0.78。综上,KGM具有良好的肠道益生元作用,γ-辐照改性有助于进一步提高KGM的肠道益生性,综 合考虑辐照效率及KGM肠道PI,推荐20 kGy作为制备KGM低聚糖的适宜辐射剂量。     

超微粉碎对魔芋葡甘聚糖物性的影响

作为魔芋葡甘聚糖超微粉碎机械力化学效应研究的一部分,研究了超微粉碎处理对魔芋粉比表面积、表观密度、流动性、色度、溶胀速度及溶胶黏度等一系列物理性质的影响。结果发现超微粉碎处理后随魔芋粉粒度的不断下降,粉的比表面积总体呈不断增大的趋势;表观密度总体呈下降趋势;粉的流动性逐渐下降;粉的色度不断改善;粉充分溶胀所需时间呈显著缩短趋势;溶胶表观黏度呈显著下降趋势。     

Eu3+ 标抗原盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫检测

采用时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)建立简便、快速、灵敏的盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride,CBL)检测方法。以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96 孔微孔板作为固相抗体,Eu3+ 标记抗原与样品中的CBL 竞争结合抗体,建立直接竞争荧光免疫分析体系。猪尿、组织样品添加回收率实验表明：方法灵敏度为0.02μg/L,样品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺等结构类似物的交叉反应率均小于1%。建立盐酸克伦特罗铕标抗原直接竞争时间分辨免疫检测方法,方法灵敏度高、特异性强,且操作简单,完全可以满足现有实际检测需求。     

魔芋重组米对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

探讨含魔芋葡甘聚糖（konjac glucomannan,KGM）的魔芋重组米对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响。采用饲喂高脂纯化饲料联合腹腔注射链脲佐菌素（streptozocin,STZ）建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、天然大米干预组、魔芋重组米低、中、高剂量组（重组米中KGM含量分别为5%、10%、15%）,饲料饮食干预30 d后测定大鼠体重、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、口服糖耐量（oral glucose tolerance,OGTT）、糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,GHb）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL-C）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL-C）及血清胰岛素（serum insulin,INS）水平。天然大米仅对2型糖尿病大鼠血清中INS、TG和TC含量有显著改善作用（P＜0.05）;而魔芋重组米低、中、高剂量组均能显著改善2型糖尿病大鼠的体重持续下降的现象（P＜0.05）,极显著降低FBG及OGTT水平（P＜0.01）,降低大鼠血清中INS、TG、TC及LDL-C含量,提高GHb及HDL-C含量。进食魔芋重组米可有效改善2型糖尿病大鼠的糖脂代谢,具有降血糖功能。     

双水相萃取直接从枯草芽孢杆菌发酵液中提取β-甘露聚糖酶

研究了聚乙二醇(PEG)平均相对分子质量、PEG浓度、(NH4)2SO4浓度、NaCl浓度对β-甘露聚糖酶和总蛋白分配系数、相体积比和萃取率的影响。实验表明PEG100020%(m/m)和(NH4)2SO415%(m/m),NaCl为2%(m/m)组成的双水相体系,室温下直接对含菌体的枯草芽孢杆菌发酵液抽提β-甘露聚糖酶,可纯化2.76倍,萃取率达98.79%。     

混合酶在澄清荔枝汁中的应用研究

采用正交设计研究了果胶酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶和α-淀粉酶联合使用对荔枝果汁澄清度、稳定性与营养成分的影响。结果表明,混合酶用于澄清荔枝汁的最优工艺条件是纤维素酶量600U/100g,果胶酶量1000U/100g,α-淀粉酶量250U/100g,木瓜蛋白酶量10000U/100g,酶解温度60℃,酶解时间4h,PH4.0,且pH为主要影响因素。与原汁相比,经混合酶处理后的荔枝澄清汁的稳定性得到提高,且可溶性固形物、总糖、还原糖、总酸和氨基酸含量也明显得到提高。     

黑曲霉ATCC16404固体发酵豆皮产生木聚糖酶的研究

以豆皮为原料,用黑曲霉ATCC16404固体发酵产木聚糖酶,采用DNS测定酶活,研究了最佳产酶培养基配比,优化产酶最佳条件。单因素实验结果表明,最佳培养基配方为：以硫酸铵为氮源,矿质元素添加硫酸镁,添加量均为2%（w/w以豆皮干重计）,豆皮颗粒大小为25～50目,不外加碳源,不加表面活性剂。选择料液比、初始pH、培养时间、接重量优化产酶条件,正交实验结果表明,最佳产酶条件为：料液比1∶1.00（w/v）、初始pH5.5,培养时间3d,1.0×107/mL浓度孢子悬浮液接种0.3mL/10g,在此条件下酶活为366.29U/g。