人甲胎蛋白 AFP 在大肠杆菌中表达和鉴定

本研究通过应用基因工程技术,重组构建编码人全长甲胎蛋白AFP基因的原核表达载体pET22b-AFP,并将其转化到大肠杆菌宿主菌BL21（DE3）中进行诱导表达目的蛋白AFP。采用PCR法扩增编码AFP蛋白的cDNA序列片段,并将其克隆到含有His-tag的pET22b原核表达载体上;重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行IPTG诱导表达;对诱导过程中不同浓度的IPTG和不同的温度进行优化;选定最佳的优化条件进行诱导表达目的蛋白;SDS-PAGE电泳和Western Blot法鉴定表达产物。结果表明,通过PCR扩增技术获得了编码AFP蛋白的基因片段;重组质粒经双酶切和基因测序等方法鉴定后,确认了重组质粒已经构建成功;表达产物通过利用SDS-PAGE和Western Blot法检测到在66 kDa附近出现条带,与预期值相符,表明重组AFP蛋白已成功表达。     

β-谷甾醇脂质体包载乳源活性成分的研究

以大豆卵磷脂和植物甾醇为包封材料,用薄膜法制备胰岛素脂质体,用凝胶层析法分离脂质体与游离胰岛素并测定目标组分包封率.当卵磷脂与β-谷甾醇质量比为1.75:1,胰岛素溶液质量浓度为2.0g/L,制备温度为42.3℃时,包封率达到53.8%.显微观察显示β-谷甾醇脂质体为典型的球状多室形态,平均粒径约3.086μm.在模拟人体消化体系中,该脂质体包载可提高生物活性成分对酸、酶的抵抗能力.该脂质体制剂应用于牛奶体系,可耐受巴氏消毒处理(63～65℃/30min),在冷藏条件下最初7 d内具有很好的稳定性,8～9d后脂质体之间发生聚集、融合,分散悬浮稳定性显著降低.β-谷甾醇-卵磷脂脂质体具有作为乳源活性成分强化载体的潜力.     

阿魏酸-普鲁兰多糖接枝共聚物的制备及其抗氧化活性研究

普鲁兰多糖为水溶性多糖,在食品加工、农产品及海产品保鲜、包装、医药领域有广泛用途。但是普鲁兰多糖本身的抗氧化性能却不高,从而一定程度上限制了它的应用。本研究选用普鲁兰多糖和阿魏酸为原料,以4-二甲基吡啶(DMAP)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)为催化剂成功制备了三种具有不同接枝度的阿魏酸-普鲁兰多糖接枝共聚物(FAP)。利用核磁共振氢谱、红外光谱、紫外光谱、薄层色谱层析对共聚物进行了结构表征,确定两者是以酯键进行连接。通过共聚物对DPPH、ABTS、羟基自由基的清除能力及还原能力测试,并以普鲁兰多糖为对照,显示共聚物对各种自由的清除作用及还原能力均有显著提高,且随着共聚物中阿魏酸接枝比例的增加而增强,说明两者的复合能显著增强普鲁兰多糖的生化活性。     

不同大麦籽粒品质及发芽后蛋白质含量和主要水解酶活力变化的研究

研究了12种国内外大麦籽粒的外观和基本理化品质,检测其发芽前后清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4种蛋白质亚组分的含量及主要水解酶活力的变化,探讨了部分蛋白亚组分与总蛋白、酶与蛋白及酶与酶之间的相关性.结果表明:1号和3号大麦籽粒品质较好,具有开发啤酒大麦的潜力;发芽后大麦总蛋白含量基本不变,清蛋白大幅增加,球蛋白略降低,贮存蛋白(醇溶蛋白与谷蛋白)总体降低.相关性分析表明:大麦和麦芽中贮存蛋白的含量反映了其总蛋白的含量;α-淀粉酶与清蛋白呈负相关性,蛋白酶与清蛋白呈正相关性,β-淀粉酶与总蛋白、蛋白亚组分及蛋白酶之间存在显著正相关性.     

赤灵芝中水溶性蛋白响应面法优化提取

以赤灵芝为原料提取水溶性蛋白,比较了浸提时间、温度、pH、液料比及提取次数对水溶性蛋白提取率的影响,并以浸提时间,温度、pH以及液料比为考察因素,采用RSA响应面分析法,确定了水溶性蛋白提取的最佳工艺参数,即液料比34.42 mL/g,浸提温度26.56℃,浸提时间8.87 h,pH 8.89.在此优化工艺下水溶性蛋白提取率预测值为82.59 mg/g,验证实验中实际测得水溶性蛋白提取率为81.35 mg/g,预测值与实际值无显著差异.     

破壁提油灵芝孢子粉羧甲基化研究

以破壁提油灵芝孢子粉(SDGLS)为原料,以氢氧化钠为催化剂,氯乙酸为醚化剂,对破壁提油灵芝孢子粉的羧甲基化进行了研究。结果表明,制备羧甲基破壁提油灵芝孢子粉的较佳工艺条件为:SDGLS 1.00g,80%的乙醇20mL,氢氧化钠用量1.20g,氯乙酸用量1.18g,碱化时间2h,醚化温度45℃、醚化时间20h。此条件下,羧甲基破壁提油灵芝孢子粉的取代度(DS)达0.78,溶解率高达91%。     

GC-MS对不同奶味香精成分分析及香气变化规律

利用GC-MS分析方法,比较了自制的天然酶解奶味香基和不同奶味香精的组成成分及香气变化规律。复配香精A、复配香精B、复配香精C、复配香精D、天然发酵香精E、自制酶解香基F中分别鉴定出18、22、30、15、30、14种组分,组分种类包括酸类、内酯类、脂肪酸酯类、芳香及杂环类、酮类、醇类、烃类等7种类型。不同复配香精之间的区别主要是酸类、内酯类和脂肪酸酯类之间的比例和数量有所不同,进口天然香精E各组分分布较均衡且含有较多的芳香及杂环类,自制酶解香基F的酸类比例较大以及特征性香气成分含量少。增加香气成分的种类,均衡各香气成分间的分布,可从一定程度上提高香气品质。     

苦瓜果实中多糖的分离纯化及性质分析

以苦瓜果实为材料,经热水抽提、乙醇沉淀和Sevag 法去蛋白后获得了苦瓜果实粗多糖(MCP)。MCP 经DEAE- 纤维素柱离子交换柱层析分离得到4 个级分MCP-A、MCP-B、MCP-C 和MCP-D。MCP-A 经Superdex G-100 柱进一步纯化得到苦瓜果实多糖MCP-A1 组分。MCP-A1 经高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定为均一组分,测定其平均分子量为93577D。经过对其理化性质鉴定表明,MCP-A1 不含蛋白质、核酸,含有糖醛酸,为非淀粉类多糖。红外光谱扫描结果表明,其具有典型的多糖吸收峰。     

微波动态循环阶段连续逆流提取二氢杨梅素

引言 微波提取是一项新型的中药有效成分提取技术,具有加热速度快、能耗低、提取效率高等优点[1-3].动态循环阶段连续逆流提取是一种增大传质推动力、提高提取效率的提取技术[4].它是将多个提取单元科学组合,使单位时间内固液两相保持较高的浓度差,从而提高提取效率.     

表面活性剂作为谷氨酸发酵促进剂的研究

通过对预先选择的7种表面活性剂作为谷氨酸发酵促进剂效果的初步筛选,得知两性甜菜碱449和芹菜素硬脂酸酯对产酸率提高有较为明显的效果;进而从加入时间、加入剂量两个方面考察了筛选出的两种表面活性剂对谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)T-613菌体生长和谷氨酸发酵产酸的影响,考察了两种表面活性剂同时加入的协同效果,得到了最佳发酵工艺参数。研究结果表明,菌种对数生长期(第3 h)加入质量分数为10%的两性甜菜碱449型表面活性剂2.5 mL,发酵中后期(第12 h)加入质量分数为0.5%的芹菜素硬脂酸酯0.8 mL,在不影响菌种生长的前提下,促使谷氨酸产酸率由3.05%提高到3.76%,较原产酸率提高了23.28%,发酵周期由44 h下降为36 h,缩短了8 h。