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建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测变形杆菌属(Proteus)的方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。通过对GenBank中变形杆菌属atpD基因序列(AX109601)进行分析,设计了6条引物(2条内引物、2条外引物、2条环引物),在Bst大片段聚合酶的作用下,对模板DNA进行梯状等温扩增,产生白色沉淀,并且优化LAMP的反应体系,检验其灵敏性与特异性。扩增产物用限制性内切酶Psp1406Ⅰ(AclⅠ)酶切,观察酶切片段大小,验证方法的正确性。结果表明,该方法在61℃保温50 min即可完成,最低检测限为5.4 CFU/mL,灵敏度高于常规PCR 10倍。对其它食品病原菌进行检测,结果均未出现目的条带。表明LAMP法检测变形杆菌属灵敏度高、特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,有恒温加热设备就可以满足检测条件,极适合在我国广大基层实验室开展应用。 相似文献
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[目的]利用环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌.[方法]以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)作为靶序列,设计引物,优化Mg<'2+>浓度、Bst酶浓度等反应条件,建立LAMP反应体系.[结果]确定了环介导等温扩增技术检测志贺氏菌的适宜反应条件;该法检测志贺氏菌的灵敏度为62 cfu/ml.[结论]该研究初步建立了一种利用LAMP快速检测志贺氏菌的方法,为食品中志贺氏菌快速检测构建了一个技术平台. 相似文献
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以胡麻籽为原料,采用复合酶酶解技术对胡麻籽油进行提取,考察了预处理方法、粉碎时间、酶的种类、复合酶复配比例及复合酶添加量对胡麻籽油提取率的影响,在前期实验的基础上,采用中心组合设计,对液料比、酶解pH、酶解温度及酶解时间进行了响应面优化。结果表明:高压高温湿热法预处理,胡麻籽在10 000 r/min转速下粉碎90 s利于胡麻籽油的提取;最佳复合酶制剂组成为中性蛋白酶与戊聚糖酶质量比2∶1,复合酶的最适添加量为1.2%(以脱壳胡麻籽质量计);响应面优化的最适工艺参数为液料比9.19∶1、酶解pH 5.94、酶解温度53.62℃、酶解时间3.20 h;在最适工艺条件下,胡麻籽油提取率可达86.73%。 相似文献
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从梨果园土壤中分离出1株产香性能好的酵母菌株Y-5,经中科院微生物所鉴定为酵母属(Saccha-rorayces)的酿酒酵母(Sacchromuces cerevisiae).采用4因素3水平正交试验确定了Y-5菌株酿造鸭梨果酒的最佳工艺条件为:发酵温度25℃;接种量1.0×107 cfu/mL;初始pH值4.0;初始糖度150 g/L.在最佳工艺条件发酵鸭梨果酒,Y-5酵母菌株生长良好,对数期短,稳定期为2d,最大菌数为16×107 cfu/mL;最终酒精度为8.5%vol、pH值为3.4、降糖速率快,酵母絮凝情况良好.感官评定表明,Y-5酵母菌所发酵的鸭梨果酒的风味明显优于对照菌株ADY所酿造的鸭梨果酒,较好地保留了鸭梨的原果香,典型性较强. 相似文献
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做任何项目都要有前期预测和估量,适时估计对计算机软件工程尤为重要。对计算机软件工程项目的前期评价和估量做出一个预测,可以理解为计算机软件估计技术的定义。计算机软件估计技术在我国还处于理论研究和初期实践阶段,软件行业实践较少。文章首先对计算机软件评估技术做出一个概括性描述,其次对计算机软件项目估计三方面具体分析,最后对当前估计技术的国内外发展做进一步介绍,让读者了解该项技术的现状。 相似文献
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产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一种重要的引起人畜共患病的致病菌,能引起水样便及酸中毒,建立快速、准确的检测方法对预防和控制产肠毒素大肠埃希氏菌的感染具有重要意义。基于ETEC不耐热肠毒素LT基因序列,设计LAMP引物检测产肠毒素大肠埃希氏菌。结果表明:LAMP检测产肠毒素大肠埃希氏菌的检出限为32.9cfu/mL,人工污染生猪肉的检出限为55cfu/g。LAMP将可以成为替代PCR的核酸扩增新技术,为快速检测产肠毒素大肠埃希氏菌构建了一个技术平台。 相似文献