基于代谢途径改造谷氨酸棒杆菌生产L-缬氨酸

L-缬氨酸是一种重要的支链氨基酸，随着市场对其需求量的不断提升，进一步提高L-缬氨酸的产量和糖酸转化率具有重要意义。在该研究中，使用实验室保藏的谷氨酸棒杆菌VHL-1作为出发菌株，通过对L-缬氨酸合成路径进行代谢改造显著提高了L-缬氨酸的产量和丙酮酸前体物的供应。首先，通过敲除ldh(编码乳酸脱氢酶)、poxB(编码丙酮酸氧化酶)、pyc(编码丙酮酸羧化酶)基因以及弱化alaT(编码丙氨酸转氨酶)基因表达来实现丙酮酸的富集。其次，通过强启动子P_tuf替换ilvBNC操纵子原始启动子并增加ilvBN(编码乙酰羟酸合酶)基因拷贝数来增强丙酮酸向L-缬氨酸合成的碳代谢流。最后，通过过表达支链氨基酸转运蛋白编码基因brnFE和调节蛋白编码基因lrp增强L-缬氨酸胞外输出效率。最终构建的重组菌株VHL-9在5 L生物反应器中进行补料分批培养，L-缬氨酸产量可到达(82.5±5.6) g/L,生产强度为1.15 g/(L·h),糖酸转化率为0.302 g/g葡萄糖。     

大肠杆菌胞内L-丙氨酸响应型启动子的筛选与表征

该研究通过对L-丙氨酸压力下大肠杆菌的转录组进行分析，利用mKate荧光蛋白进行表征，筛选响应L-丙氨酸的启动子元件。转录组筛选了ArgK、FlgG、GlgP、CpxP、BetA、GlpA、KdpB、PulG、LivH和YhfX十个在L-丙氨酸压力下转录水平显著提高的基因，并将基因前500 bp潜在的启动子片段与荧光报告蛋白基因m Kate融合，筛选得到特异性响应L-丙氨酸浓度的启动子P_Ala-7。结果表明，P_Ala-7启动子在10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L和60 g/L L-丙氨酸诱导后的相对荧光强度分别增加了49%、122%、181%、275%、432%和705%，表明P_Ala-7启动子在L-丙氨酸质量浓度0～60 g/L范围内有着良好的灵敏性。选择11种常见氨基酸诱导P_Ala-7启动子表达，只有L-丙氨酸在诱导质量浓度从10 g/L增加到20 g/L时，相对荧光强度增加了52.4%，表明P_Ala-7启动子是特异性响应L-丙氨酸的启动子...     

黑龙江省经济波动的模糊聚类分析

省区经济作为中国经济系统中的一个子系统，其波动是中国经济波动的大背景下发生的。没有充分发了解中国经济波动的成因机理，将很难透彻底释省区的经济波动问题。分析了中国经济波动机理，在此基础上，利用模糊数学聚类分析模型对黑龙江省近十几年来的经济波动进行聚类，结合该省具体的方针、政策分析波动成因，总结以往经验，认为１９９４年省委七届三中全会提出的全省经济发展总体思路是行之有效的，根据１９９８年以来经济形势的