PCR 方法检测河豚鱼的引物筛选及反应体系优化

根据Genbank 公布的河豚鱼细胞色素b 基因序列,应用软件Primer Premier 5.00 版设计了7 对引物,经过PCR 筛选,确定可以在所有8 个供试河豚鱼样品中检出目的DNA 片段的引物HT-1,用于建立河豚鱼的PCR 检测方法。对该PCR 方法中6 个因素包括退火温度、Mg2+ 终浓度、Taq DNA 聚合酶用量、dNTPs 终浓度、引物终浓度和模板DNA 用量进行优化,确定优化的PCR 扩增体系：10 × PCR 缓冲液2μL,MgCl2 终浓度1.5mmol/L,Taq DNA 聚合酶1.0U,dNTPs 终浓度300μmol/L,引物终浓度0.2μmol/L,DNA 模板400ng,加纯水至总体积20μL。扩增程序定为94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40 个循环,72℃延伸5min。据此建立河豚鱼成分PCR 检测方法,并通过河豚鱼与非河豚鱼的PCR 检测结果比较,验证了该方法的河豚鱼特异性。研究结果还表明,该方法的检出限为0.1%,含量为0.1% 的河豚鱼样品PCR 检出率至少在97.5% 以上。     

饲料中的转基因成分在家禽体内代谢残留的研究

用含20%抗草甘膦转基因豆粕的饲料喂养蛋鸡、番鸭,通过检测其内脏、肌肉、血液、粪便及肠道微生物的豆粕转基因成分,探讨饲料中转基因成分在家禽体内的代谢残留状况。以定性PCR检测含20%转基因豆粕的饲料及蛋鸡、番鸭的八种内脏样品(肠、胰腺、食道、肝、腺胃、肾、心脏、肌胃)、肌肉、血液、蛋品、粪便、肠道微生物的转基因豆粕的工具基因CaMV35S启动子与NOS终止子以及目的基因CP4-EPSPS等外源基因成分。PCR检测结果表明:除了含20%转基因豆粕的饲料外,蛋鸡、番鸭的八种内脏器官、肌肉、血液、蛋品、粪便及肠道微生物中均未检出转基因豆粕的CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS等外源基因成分。检测结果表明:长期喂养含20%转基因豆粕饲料的蛋鸡、番鸭的八种内脏器官、肌肉、血液、蛋品、粪便及肠道微生物中均未发现有转基因成分残留,说明饲料中的转基因成分,通过肠胃消化后充分降解,不会在鸡、鸭体内残留,也不会通过粪便排泄而扩散到土壤环境中。     

食品安全与WTO/SPS原则

回顾国际社会为食品安全所做的工作,分析各种食品安全壁垒对国际食品贸易的影响,论述WTO/SPS协定关于食品安全措施的原则,并进而得出结论:风险分析(评估)已在国际食品贸易中成为整个食品监管体系的极为重要的前提,并被公认为是制订食品安全标准的基础。     

双孢蘑菇SRAP、ISSR、RAPD标记遗传多样性和菌群分类研究

通过PCR试验,筛选能扩增清晰稳定的DNA条带的53对SRAP引物、10条ISSR引物和56条RAPD引物。SRAP、ISSR和RAPD 3种DNA分子标记扩增位点的平均多态率分别为70.21%、78.33%、61.94%。SRAP、ISSR和RAPD扩增结果用0与1表示,共获得1 046个位点的42 840个数据。采用组间距离法和Jaccard相似性系数,应用SPSS 11.0 for Windows软件进行聚类分析,构建40个双孢蘑菇样品的遗传关系树状图。当组间距离值取16时,40个双孢蘑菇品种可分为6个类群;当组间距离值取13时,40个双孢蘑菇品种被分为9个类群。     

HACCP保证食品安全的利器（一）

HACCP是什么?是“危害分析和关键控制点”的英文首字母缩写;是一个由七个基本原理构成的理论表述;是一个应用于食品加工过程的操作计划;是一个食品安全控制的预防性体系……;是一个保证食品安全的利器。 为什么要研究、开发、 应用HACCP理论原因之一:传统的食品生产管理方法难于保证生产出安全的食品。     

致病性迟钝爱德华氏菌毒力基因的PCR检测

为了筛选可用于检测致病性迟钝爱德华氏菌的毒力基因,最终建立致病性迟钝爱德华氏菌PCR检测体系.根据致病性迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda,E.et w.)PPDl30/91分离株的6个毒力基因citC,fimA、gadB、katB、mukF、esrB序列,设计了6对引物,进行PCR扩增、引物灵敏度试验及特异性试验.结果显示:在国内分离的3个致病株中同时出现citC.fimA、gadB、mukF 4个毒力基因,而katB和esrB毒力基因未出现.各毒力基因单重PCR灵敏度试验中,gadB基因可检测到的模板量为1 pg,其余3个毒力基因可检测到的模板量为100Pg.在特异性试验中,11株常见致病菌没有扩增出与目的基因大小相近的片段,引物特异性良好.由此推断,citC、fimA、gadB、mukF 4个毒力基因中的任意一个,均可作为检测致病性迟钝爱德华氏菌的标志物,但此结论还有待于更多国内分离株的验证.     

成绩·问题·探讨(下)——国家标准《罐头食品商业无菌的检验》实施十年回顾

<正> 业界不足之处 无庸讳言,《罐头食品商业无菌的检验》标准在推动我国罐头食品加工业发展,促进我国罐头食品生产加工、内外贸经营,以及检验检疫工作取得长足进步的同时,也暴露出由于历史和现实的原因。由于在等效采用国际标准时,因理解差距带来标准的自身不足。这些不足之处主要表现在以下两方面:     

成绩·问题·探讨(上)——国家标准《罐头食品商业无菌的检验》实施十年回顾

<正> 自国家标准GB4789.26-89《罐头食品商业无菌的检验》于1990年5月1日实施以来,至今已有10年。这10年既是我国罐头食品加工和经营(包括出口加工和经营)发生“两个根本性转变”的10年,也是检验检疫机构执行该标准(以及其他罐头食品检验标准,特别是《出口罐头检验规程》系列标准),对进出口罐头食品在检验检疫和监督管理方面,实现从原先重品质检验转向重安全卫生     

文蛤中副溶血性弧菌的风险评估

本文基于国际食品法典委员会(CAC)关于微生物定量风险评估的理论框架,对从水产品批发市场到销售终端过程中,因食用文蛤感染副溶血性弧菌而引发疾病的风险进行预测,预测出每年、每人因消费生文蛤而导致由副溶血性弧菌引发的食源性疾病的可能平均值被估计为1.48×10-8。同时对文蛤的另一种食用模式-烧烤,进行了分析研究,确定因其所导致的风险很小,可以不做为评估的对象。     

转基因产品中常见外源基因的克隆与转化

设计带不同酶切位点的引物,分别用PCR扩增植物内源rbcL基因和2种转基因产品中常见的外源基因-CP4-EPSPS基因和BAR基因,并分别与pGEM-TEasyVector连接,克隆到大肠杆菌DH5α中。提取克隆菌落的质粒,并进行酶切鉴定和序列测定。对3个基因的克隆质粒进行相应的双酶切,回收酶切产物,先后转化到受体载体pCAMBW中。最后获得的重组质粒的酶切和PCR鉴定结果表明3个基因已被成功转化到受体载体中。