谷氨酸棒杆菌代谢副产物对α-酮戊二酸积累的影响

谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可以催化丙酮酸转化生成乳酸,ackA和pqo基因编码乙酸激酶和丙酮酸:醌氧化还原酶,可以催化丙酮酸转化为乙酸.为了研究这三个基因缺失对谷氨酸棒杆菌α-酮戊二酸积累的影响,以Cglutamic um GDK-10为出发菌株,通过重叠延伸PCR及同源重组技术分别构建ldh,pqo,ackA,pqo和ackA基因缺失突变株GDK-14,GDK-15,GDK-16,GDK-17.对出发菌及上述重组菌株进行发酵验证比较,发酵结果表明:ldh和pqo基因缺失菌株的α--酮戊二酸产量分别比出发菌降低了8.54％和27.9％,而ackA基因的缺失使α-酮戊二酸产量比出发菌提高了8.99％.     

代谢工程改造大肠杆菌合成L-异亮氨酸的研究

以L-苏氨酸生产菌Escherichia coli THRD为出发菌株,利用基因重组技术替换ilvLXGMEDA启动子并过表达解除L-异亮氨酸反馈抑制的ilvA和ilvIH,以期获得L-异亮氨酸生产菌.将ilvLXGMEDA启动子替换为强启动子Ptrc并敲除ilvLXGM后获得ILE01菌株,于该菌株中分别过表达解除L-异亮氨酸反馈抑制的ilvIH及共表达解除L-异亮氨酸反馈抑制的ilvA和ilvIH,获得菌株ILE02和ILE03,其L-异亮氨酸产量分别达到1.75 g/L和2.19g/L.针对ILE03 α-酮丁酸积累量过高的问题,通过改变操纵子中ilvA和ilvIH的顺序调节其转录水平,获得菌株ILE04,其L-异亮氨酸产量达2.85 g/L.利用ILE04于5L发酵罐中进行发酵实验,L-异亮氨酸产量、发酵强度及转化率分别为5.23 g/L、0.17 g/(L·h)及4.6％.     

利用重组嗜热栖热菌尿苷-胞苷激酶生产尿苷酸

尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)分别成功克隆表达了来源于嗜热栖热菌(Thermus thermophilus HB8)以及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)的尿苷-胞苷激酶。对比分析了不同重组尿苷-胞苷激酶的催化特性发现,来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶能以鸟苷三磷酸(Guanosine 5'-triphosphate,GTP)或者腺苷三磷酸(Adenosine 5'-triphosphate,ATP)作为磷酸供体催化尿苷生成尿苷酸,而来源于枯草芽孢杆菌的尿苷-胞苷激酶只有以GTP作为磷酸供体时的催化效果较好。在优化的反应条件下,使用来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶,6 h可催化10 mmol/L的尿苷和10 mmol/L的ATP生成8.74 mmol/L尿苷酸。研究结果表明,以ATP作为磷酸供体的尿苷-胞苷激酶可作为一种新型的催化剂用于尿苷酸的研制与生产。     

剪力墙竖向分布钢筋偏移原因分析及处理办法

剪力墙竖向分布钢筋偏移是高层住宅建筑比较常见的一个施工问题。通过对施工过程进行剖析,找出其偏移的原因,然后采取措施来减少偏移问题的出现,最后对结构进行分析,找出竖向分布钢筋对结构的影响,并针对竖向分布钢筋所起的作用,对不同的情况提出处理办法。     

铝模板在高层建筑施工中应用及经济性分析

以太原市翔建·御景华府项目为例,介绍了铝模板的优势及缺点,对铝模板在高层建筑施工应用中的关键技术要点进行了分析,并与传统木模板成本比较进行了经济性分析,最后就铝模体系在实际过程中的应用阐述了一些感悟,以供参考。     

南水北调机械化渠道衬砌施工技术

介绍渠道机械化衬砌在南水北调工程的应用,本文通过对现阶段两种主流衬砌设备的性能对比,总结性地提出衬砌混凝土的操作要点。     

粉刷石膏施工过程中裂问题的解决方案

针对粉刷石膏在施工中存在掉粉、脱落和开裂等问题，对比研究了缓凝剂、保水剂和石膏基粉等的选择对抹灰开裂程度和施工质量的影响。实验结果表明：SC型缓凝剂比柠檬酸效果要好，初凝时间的测试确定了缓凝剂SC的掺加量为0.25％；粉刷石膏随保水剂黏度和用量的增加，其抹灰性能增强，对保水率的测试确定了MC（4万）的保水剂掺加量为0.2％；当石膏基粉强度增加时，制品开裂程度明显降低，XRD分析表明不同强度的基粉物相均为半水石膏。     

大肠杆菌生产莽草酸的基因工程菌构建

莽草酸是芳香族氨基酸合成中的重要中间代谢物,可用于多种药物的化学合成.在代谢工程理论的指导下,构建积累莽草酸的高产菌株.通过构建敲除编码莽草酸激酶的基因aroL与aroK的菌株阻断莽草酸的代谢;通过构建敲除编码奎尼酸/莽草酸脱氢酶的基因ydiB的菌株减少副产物的合成;同时通过构建人工操纵子过表达编码DAHP合酶、莽草酸脱氢酶、脱氢奎尼酸脱水酶和三脱氢奎尼酸合酶的基因aroG,aroE,aroD和aroB以强化莽草酸合成途径.最终得到E.coliSHIK△aroL△ydiB菌株,摇瓶发酵能够积累莽草酸5.5 g/L.     

一种诊断车辆发动机技术状况的模糊模型

为了了解和掌握实际工作中的车辆发动机的技术状况,基于实车在线检测的车辆发动机性能参数,提出了以模糊数学诊断车辆发动机技术状况的方法,建立了模糊模式识别模型,定义了诊断参数。以12150L型车辆发动机为例进行了技术状况的诊断,结果表明这种模型对于车辆发动机具有实用价值。     

酸马奶酒中乳酸菌和酵母菌互作关系的研究

选取来自酸马奶酒中的2株乳酸菌(坚强肠球菌W1和粪肠球菌W2)和2株酵母菌(厚壁酵母属J1和娄德酵母属J2)进行互作关系的研究,采用固体平板涂布法的定性研究法和液体培养测定OD值、pH、滴定酸度的定量研究法。结果表明:2株乳酸菌发酵液都对酵母菌菌落生长有促进作用,发酵液经110℃、7min灭菌后,并不影响其促进作用;2株酵母菌发酵液对坚强肠球菌W1培养过程中的OD值、pH和滴定酸度无明显影响,而对粪肠球菌W2的生长及其产酸能力具有明显地促进作用;随着发酵液的添加量增加,促进作用更为明显。