虾夷扇贝脏器硫酸酯多糖的制备及性质研究

采用氯磺酸- 甲酰胺法对扇贝脏器粗多糖进行硫酸化修饰。经红外光谱分析表明,修饰产物具有典型的多糖吸收峰和硫酸基吸收峰。硫酸酯多糖经Bio-Gel P-6 凝胶过滤柱分离后获得SSVP-I 和SSVP-II 两种多糖组分,其中组分SSVP-I 的平均分子量约为5900u,硫酸基取代度为0.98,主要由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖以摩尔比为1.0:1.3:2.4:3.0:1.3:4.1:2.5 组成。体外抗凝血实验表明,SSVP-I 能显著延长人活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT),且具有一定的剂量- 效应依赖关系。     

虾夷扇贝内脏多糖SVP-12的分离纯化及性质研究

采用蛋白酶水解提取法提取虾夷扇贝内脏粗多糖。采用2步蛋白酶-sevag法脱除粗多糖中的蛋白质。粗多糖先后经Sephacryl-S 200凝胶过滤层析柱和DEAE-52阴离子交换层析柱分离得到多糖组分SVP-12。SVP-12经高效液相色谱鉴定为均一的多糖,其分子质量约为170 ku,其中多糖含量为72.05%,蛋白含量为2.74%,硫酸根含量为12.57%,氨基己糖含量为8.46%。气相色谱法检测结果表明,SVP-12含有鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖,其摩尔比例约为1.65∶2.54∶4.05∶5.60∶1.48∶4.90∶1.00。     

虾夷马粪海胆生殖腺多糖的提取、纯化及鉴定

从虾夷马粪海胆生殖腺中提取纯化出一种多聚甘露糖物质,并对其结构组成特征进行研究。以海胆生殖腺干粉为材料,采用木瓜蛋白酶酶解、乙醇醇沉、Sevag法脱蛋白等方法提取得到海胆生殖腺粗多糖。进一步以唾液淀粉酶脱除粗多糖中的糖原组分,再经过Sepharose CL-6B色谱柱分离纯化后得到均一的虾夷马粪海胆生殖腺多糖（polysaccharide from gonad of sea urchin,SUGP）。采用红外光谱、紫外光谱、高效液相色谱法对SUGP的结构特征进行研究。结果表明：SUGP为含有甘露糖的均一多糖,分子质量为4 436 D。唾液淀粉酶可以去除多糖中的所有葡萄糖成分,之后其单糖组成仅为甘露糖,说明虾夷马粪海胆生殖腺多糖结构是由多聚甘露糖与糖原相连接构成的。     

扇贝糖原酶法提取及其硫酸化修饰条件

以新鲜扇贝闭壳肌为原料,酶法提取扇贝糖原,其得率为13.78%,其中糖质量分数为91.62%,蛋白质质量分数为1.4%。采用氯磺酸-吡啶法对所提取扇贝糖原进行硫酸酯化修饰,以硫酸取代度(DS)为指标,对硫酸酯化试剂体积、反应温度以及反应时间进行优化。实验结果显示,最佳修饰条件为酯化试剂中氯磺酸与吡啶的体积比为1∶5,反应温度为60℃,反应时间为3h。经红外光谱分析表明,硫酸基与扇贝糖原形成硫酸酯化合物。     

共轭亚油酸的三氟化硼-甲醇的衍生化条件优化

对共轭亚油酸进行三氟化硼-甲醇衍生化时,采用不同条件处理共轭亚油酸,常常导致共轭亚油酸的不完全和异构化,从而影响到分析的准确度。本文报道对化学合成共轭亚油酸的三氟化硼-甲醇衍生化方法实验研究。阐明三氟化硼在甲醇中的浓度、反应温度和反应时间对衍生化效果的影响。确定最佳衍生化条件:三氟化硼与甲醇的质量比为10∶100、反应的温度为45℃、反应时间为30 min。     

三种色谱法分析鲍鱼生殖腺多糖的单糖组成

为了选择一种准确有效的方法测定鲍鱼生殖腺多糖(AGP-32)的单糖组成。采用薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法对AGP-32的单糖组成进行测定。结果表明:高效液相色谱法较其它色谱方法具有分离效果好,并可同时检测中性糖、糖醛酸和氨基糖等特点,并利用该法得到单糖组成的摩尔比为Man∶Rha∶GlcA∶GalA∶Glc∶Gal∶Xyl∶Fuc=0.79∶2.05∶1.6∶0.58∶0.09∶4.91∶0.11∶0.34。说明高效液相色谱法较其它色谱法更加适合于鲍鱼生殖腺多糖这类复杂样品的单糖组成分析。     

扇贝性腺多糖提取物的抗氧化及免疫调节活性

通过酶解法制备扇贝性腺多糖提取物(SGP),研究其抗体外氧化及免疫调节活性。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼DPPH体系反应、Fenton反应和还原反应测定SGP的抗氧化活性;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定SGP 对活性氧叔丁基脂氢过氧化物(tBOOH)致细胞氧化损伤及淋巴细胞增殖活性的调节作用;分光光度法测定SGP 对补体活性的影响。结果表明：SGP具有DPPH自由基清除能力(IC50=9.92mg/mL)和羟自由基清除能力(IC50=7.31mg/mL)及还原能力(AC20=7.74mg/mL);0.2μg/mL的SGP可明显改善tBOOH致RAW264.7细胞的氧化损伤作用,还可显著提高脾淋巴细胞的增殖活性及补体经典途径活性。     

皱纹盘鲍内脏β-1,3-葡聚糖酶的提取及其酶学性质研究

从鲍鱼内脏提取β-1,3-葡聚糖酶粗酶并研究其酶学性质。以昆布多糖为底物监控酶的活性。鲍鱼内脏经匀浆后,采用3倍体积0.1mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH6.0）浸提12h。浸提液经离心后收集上清液,并采用60%饱和度的硫酸铵对上清液中的蛋白进行盐析沉淀得β-1,3-葡聚糖酶粗酶。研究表明,粗酶中β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为40℃,酶活力在40℃以下稳定;酶的最适pH为6.0,酶活力在pH4.0～7.0范围内稳定。Mn2+能明显激活酶活力,而Cu2+、Fe3+、Hg+对酶活力有抑制作用,其中Fe3+的抑制作用最强;亮肽酶素和1,10-菲啰啉对酶活力有明显的抑制作用,而E-64对酶活力有一定的激活作用;此酶对海藻酸钠也有一定水解能力。