流式细胞术检测单增李斯特菌与酿酒酵母

为探讨流式细胞术对单增李斯特菌和酿酒酵母的活菌与热灭活菌的检出效果,本文采用荧光染色试剂SYTO-9和碘化乙锭(PI)对单增李斯特菌和酿酒酵母的活菌与热灭活菌的细胞悬液进行染色,采用流式细胞仪同时测量红色荧光与绿色荧光从而得出细胞悬液中的细菌和酵母的含量。结果表明经核酸荧光染料染色后,再结合流式细胞术对细菌与酵母菌进行检测,步骤简单、耗时短。该法不仅简化了测量步骤且分辨率高,对单增李斯特菌和酿酒酵母均具有良好的检出结果,能分辨同一体系中同一菌种的活细胞与热灭活细胞和同一体系中的细菌与酵母活细胞;该法检出限低,将单增李斯特菌稀释后,最低检出限可达1.2×104 cells/mL,将酿酒酵母稀释后,最低检出限可达6×103 cells/mL,因此能大大缩短增菌时间或者避免繁复的增菌步骤。     

CUPRAC-BCS酶标仪法测定凉茶的抗氧化性

利用酶标仪对铜离子还原能力法Cu-BCS体系（CUPRAC-BCS法）的测定参数进行了优化,确定的检测条件为：CuSO4溶液浓度为1mmol/L、BCS溶液为2mmol/L、体系pH7.4、反应时间20min,490nm检测。应用新建立的＂CUPRAC-BCS酶标仪法＂对16组凉茶样品抗氧化性进行检测,结果表明该法的测定结果与总酚含量（TPC）、DPPH、Fe3＋还原能力法的相关性均达到显著水平（P〈0.05）。此方法线性范围为0.1～0.5mmol/LTrolox当量,R2=0.9965,是一种快速、简单、重现性好、具有高通量特点的总抗氧化能力测定方法。     

金黄色葡萄球菌活的非可培养状态复苏及PMA-qPCR检测

为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养（VBNC）状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和PMA-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明：8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌48 h后复苏,同时PMA-qPCR能够有效检出VBNC状态金黄色葡萄球菌,克服传统平板计数法对于VBNC菌的漏检。     

高分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶血性弧菌

为建立一种快速鉴定副溶血性弧茵的HRM（高分辨率熔解曲线）real-timePCR法,以toxR为靶基因,结合特异性引物,通过优化反应体系及条件,进行特异性、敏感性及重复性评价,并初步应用于90份送检的鲜活海产品样本的检测。特异性试睑表明,该方法能选择性检测副溶血弧菌,Tm值为76．64±0．57℃;而与创伤弧菌、霍乱弧茵、金黄色葡萄球菌等多种海产品中常见的食源性病原菌没有交叉反应。灵敏度试验表明,该方法最少可检测toxR重组质粒的浓度为3．50×102copies／mL。重复性试验表明,同一样品于试验内及试验问的平均Tm值分别为76．53±0．35℃和76．74±0．52℃,变异系数分别为0．56±0．42％和1．11±0．73％。对90份鲜活海产品样本的检测证实该法可使阳性检出率从国标法的14．44%高至18．89％。本研究所建立的副溶血性弧菌HRMreal-ILrnePCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能应用于食品样本的检测,具有很好的研究价值和应用前景。     

清理和制粉工艺对去除污染小麦中DON效果及其小麦粉品质的影响

通过检测小麦清理工艺中各步骤的小麦和6种污染程度不同的小麦实验制粉后各粉路的DON含量,研究清理和制粉对小麦中DON的去除效果;通过检测污染前后小麦籽粒及其小麦粉的品质指标的变化,研究赤霉病对小麦及小麦粉食用和加工品质的影响。结果表明:清理和制粉均对DON有很好的去除效果,赤霉病感染小麦的加工和食用品质均下降,并随着污染程度的加深,品质越来越差。经过清理后,小麦中的DON含量由初始的1.56mg/kg下降到1.18mg/kg,DON去除率达24.36%,其中擦皮除菌机和色选机的清理效果最佳。6种污染程度不同的小麦实验制粉后,DON均有不同程度的去除,最高可达46.96%,轻度污染的小麦制粉后可达到国家产品安全标准要求。小麦中DON主要集中在小麦皮层部分,从外到内依次降低,小麦中心胚乳的DON含量最低;赤霉病对小麦及小麦粉的品质有较大影响,使小麦籽粒内部结构疏松,小麦粉烘焙品质和流变学特性也逐渐下降。     

免疫磁珠分离-实时荧光PCR快速检测虾中沙门氏菌

建立了免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)联合实时荧光PCR(real time PCR)快速、灵敏地检测虾中沙门氏菌的方法。用纳米磁珠与抗沙门氏菌多克隆抗体制备免疫磁珠,优化反应条件,建立IMS方法。同时针对沙门氏菌ttr基因合成探针和引物,构建real time PCR体系,选4株代表性的沙门氏菌检测其特异性和灵敏度。结果显示,免疫磁珠的最适添加量为100μL,免疫磁珠与样品菌液的最佳反应时间为30 min。建立的免疫磁珠分离-实时荧光PCR(IMS-real time PCR)方法特异性高,对于虾中沙门氏菌的检测限为鼠伤寒沙门氏菌5×10~1 CFU/25 g,猪霍乱沙门氏菌5×10~2 CFU/25 g,肠炎沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌1×10~2CFU/25 g,检测全程可在6 h内完成。对40份实际样品,IMS-real time PCR方法与国标法检测结果完全一致。建立的IMS-Real time PCR方法用时短、灵敏度高,为水产品中沙门氏菌的快速检测提供了技术支撑,对沙门氏菌引起的食源性疾病的预防和控制具有现实意义。     

食源性致病菌通用型多重荧光PCR快速检测体系的建立

以两种食源性致病菌(沙门氏菌、单增李斯特菌)为模板,对通用型多重荧光PCR快速检测体系进行了研究。建立的通用型多重荧光PCR反应体系为:25μL反应液中,Tris-HCl为50mmol/L、pH值为8.8、KCl15mmol/L、(NH4)2SO4为8mmol/L、Mg2+为3mmol/L、dNTP为1.0mmol/L、引物和探针的终浓度分别为1μmol/L和0.5μmol/L、加入0.5μLDMSO,2.5U/份的Taq酶与等量的Taq酶抗体。     

香茅醛对金黄色葡萄球菌的抑制作用

该研究探讨香茅醛（Citronellal,CIT）对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S. aureus）的抑菌作用。采用微量肉汤稀释法及时间-杀菌曲线确定了CIT对S.aureus的抑菌活性。CIT对S.aureus最小抑菌浓度（MIC）及最小杀菌浓度（MBC）均为0.80 mg/mL,且具有快速杀菌作用,1.60 mg/mL的CIT处理0.5 h后,S. aureus活菌数从5.65 log CFU/mL下降到0.00。经CIT处理后,S. aureus胞外K+浓度显著升高至2.63 mg/L,碘化丙啶（PI）荧光强度与对照相比升高5 326.83 A.U.,表明CIT会影响细胞膜通透性,导致胞内小分子及大分子物质泄出。扫描电镜观察下发现,高浓度CIT能严重破坏S.aureus细胞形态及结构。此外,通过紫外可见光光谱发现,CIT在加入S. aureus的DNA后,吸收峰发生明显的增色效应,与对照组相比最大差值为0.45 A.U.,表明CIT可能通过沟槽结合与DNA相互作用,干扰DNA的正常生物功能,抑制细胞生长。综上所述,CIT可作为S. aureus生长...     

潜在的水体修复菌Bacillus subtilis H001的筛选及其高密度培养

在水产养殖规模日益扩大和集约化程度不断提高时,带来了养殖水体富营养化、亚硝酸盐超标、致病微生物等问题,在其中引入益生菌,可起到预防和控制的作用。从10株枯草芽孢杆菌中,筛选出菌株H001具有较高淀粉酶和蛋白酶酶活,分别为36.7U/mL和35.6U/mL。当麸皮浸汁为40g/L,玉米浸汁为15g/L,豆粕为20g/L,H001菌落总数(TCN)对数值分别为12.1,12.1和14.0。当玉米浸汁与豆粕粉质量比为2:1时,麸皮浸汁与豆粕粉的质量比为2:1时,H001的TCN对数值都约为15.0。在模拟水体中,当亚硝酸盐含量分别为5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L和50.0mg/L时,菌株H001对其降解率分别为95.0%、95.0%、84.1%、68.6%、48.5%和44.4%。综上所述,具有较高淀粉酶和蛋白酶酶活的枯草芽孢杆菌H001,其培养基经优化后TCN提高到1.6×1015CFU/mL,优化后培养基组合经济且适合于H001的高密度培养,H001是一种潜在的养殖水体修复菌。