产低温脂肪酶菌株的筛选、纯化及其部分酶学性质研究

从大黑山(大连)和海水中筛出59株低温细菌,从中筛选出10株产低温脂肪酶的菌株,分别对其进行紫外诱变,筛出一株高酶活的低温脂肪酶菌株。通过形态学、生理生化和分子生物学鉴定,菌株CZWOO1属于芽孢杆菌属(BacillusCohn),与Bacillusthuringien-si(sNR 043403.1)进化关系近,且同源性达到100%,故将其命名为Bacillus thuringiensis CZWOO1。苏云金芽孢杆菌CZW001脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤离心、DEAE-纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析获得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为75.5倍,活性回收率为37.6%,12%SDS-PAGE电泳估计其分子量约40ku。对纯化后的低温脂肪酶进行二级结构预测,结果表明其二级结构成分:α-螺旋10.6%,β-折叠40.1%,β-转角18.8%,无规则卷曲30.5%。对该菌脂肪酶的酶学性质初步研究表明,酶的最适作用温度为25℃,对热敏感,60℃处理30min仅残留30%酶活性,酶的适宜作用pH范围在7~9,最适pH值为8。     

海洋低温肌氨酸氧化酶生产菌株的筛选、鉴定及酶学特性研究

为获得更适应低温环境的产肌氨酸氧化酶菌株,该研究从渤海海泥中分离、筛选高产低温肌氨酸氧化酶菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其所产的肌氨酸氧化酶的酶学特性进行初步研究。结果表明,共分离到产肌氨酸氧化酶的菌株8株,其中菌株LYH18的肌氨酸氧化酶活力最高,为1.65 U/mL;菌株LYH18被鉴定为海泥芽孢杆菌（Bacillus oceanisediminis）;肌氨酸氧化酶的最适作用温度和pH分别为25 ℃、8.0,在温度25～40 ℃、pH 7.0～10.0的范围内,酶活性较稳定,该酶属于低温酶。     

海洋低温胆固醇氧化酶生产菌株诱变育种及酶学性质研究

利用一株来源于海洋的蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）XLH059进行紫外诱变、化学诱变及复合诱变,并对诱变菌株的遗传稳定性及胆固醇氧化酶酶学性质进行研究。结果表明,通过复合诱变育种得到酶活力最高、传代后酶活稳定的菌株XL-c23,其所产胆固醇氧化酶的最适pH值为7.0,酶活力在pH 6.0～8.0有较好的稳定性,胆固醇氧化酶最适温度为30 ℃,30 ℃以下酶活力较为稳定。     

乳酸菌降解亚硝酸盐机理的研究

对乳酸菌降解亚硝酸盐机理进行了研究。其机理为 :乳酸菌对亚硝酸盐的降解分为酶降解和酸降解 2个阶段。在发酵的前期 ,培养液 pH值 >4 5时 ,乳酸菌对亚硝酸盐降解以酶降解为主 ;发酵后期 ,由于乳酸菌本身产生酸 ,使培养液 pH值降低 ,<4 0后 ,亚硝酸盐的降解主要以酸降解为主。由于乳酸杆菌产酸能力强于球菌 ,乳酸杆菌降解亚硝酸盐能力大于乳酸球菌 ,而在发酵前期 (pH值 >4 5 ) ,杆菌与球菌降解亚硝酸盐并无差别。     

东北酸菜发酵前后期细菌菌群多样性分析

采用一种新工艺发酵制备东北酸菜,选取发酵前、后期理化指标（pH、亚硝酸盐、总酸）及OD600 nm值变化明显的两个酸菜样本,使用Illumina Novaseq测序平台进行高通量测序,研究东北酸菜发酵前、后期的细菌多样性及乳酸菌菌属变化差异。结果表明,发酵12 h和72 h时,酸菜理化指标变化明显,发酵前期（12 h）酸菜样本的物种丰富度及多样性均高于发酵后期（72 h）,两个样本在门和属分类学水平上的菌群差异不大,发酵前期样本共含7个门的44个菌属,发酵后期样本共含8个门的42个菌属。两样本均含有4种乳酸菌属,分别为魏斯氏属（Weissella）、明串珠菌属（Leuconostoc）、乳球菌属（Lactococcus）、乳杆菌属（Lactobacillus）,其中魏斯氏属（Weissella）相对丰度均最高,达25%以上,且在发酵后期4种乳酸菌的相对丰度略有下降。     

海洋低温BS041208菌株选育及发酵培养基的研究(Ⅱ)

建立了海洋低温蛋白酶菌株(Bacillussubtilis简写为BS041208)发酵最适pH值、温度、时间、接种量、通气量分别为5.0、14℃、48h、8%、150mL;在最适发酵条件下,BS041208菌株50L发酵罐中低温蛋白酶活性为1371.8U/mg。     

SOD乳酸菌高产菌株筛选鉴定及SOD分离纯化

筛选出一株产SOD乳酸菌,并对SOD进行分离纯化。采用平板富集、革兰氏染色等方法进行初筛。再通过邻苯三酚自氧化法检测SOD酶活进行复筛。并经形态学、生理生化试验、16Sr DNA基因序列分析进行菌种鉴定。通过硫酸铵沉淀、超滤、Sephadex-G100、DEAE-Sepharose FF等方法进行纯化。筛选得到一株产SOD相对较高菌株SD006,经鉴定为Lactobacillus plantarum,纯化后酶活达37 959.2 U/g。细菌SD006是一株产SOD的植物乳酸菌,乳酸菌是一种人体益生菌,乳酸菌SOD可作为食用SOD添加到食品中,具有潜在开发价值和广阔应用前景。     

肌酐水解酶菌株S-09发酵条件优化及酶的分离纯化

该实验以海洋来源的微小杆菌（Exiguobacterium sp.）S-09为出发菌株,对其发酵培养基和产酶条件进行优化。并将粗酶液经硫酸铵盐析、透析、超滤离心和Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化。结果表明,其最佳发酵培养基为0.5%的肌酐作为碳源、0.3%胰蛋白胨和0.2%玉米浆作为复合氮源,诱导物肌酸含量为0.3%;其最佳发酵条件为作用pH值7.5、温度25 ℃、装液量50 mL/250 mL、接种量3%。Fe2+和Mn2+能显著促进产酶。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶电泳结果显示,纯化后的肌酐水解酶分子质量为24.3 ku。     

L-谷氨酸氧化酶的研究进展

L-谷氨酸氧化酶是一种潜在的十分有用的工具酶,其辅酶是黄素腺嘌呤二核苷酸,是一种黄素蛋白酶类。以L-谷氨酸为底物,将其降解为过氧化氢、氨和α-酮戊二酸,具有高度底物特异性。该文从L-谷氨酸氧化酶的来源、应用、克隆表达与分离纯化进行了阐述,并对其研究前景进行了展望。     

海洋低温超氧化物歧化酶酵母菌筛选与鉴定

通过邻苯三酚自氧化法测定酶活,从渤海海域中筛选出一株高产超氧化物歧化酶（SOD）酵母菌,其SOD酶活达4 185.67 U/g湿菌体。通过形态学、生理生化鉴定,并结合26S rDNA系统发育分析,初步确定该菌株属于海洋胶红酵母（Rhodotorula sp. CD-008）。粗酶液经SDS-PAGE、Native-PAGE、酶活性染色分析,得到酶的分子质量为37.5 ku,推测SOD类型为Cu/Zn-SOD。为研究超氧化物歧化酶在生物体内抗氧化作用以及在医、药、食品等方面的应用奠定了基础。