转拟南芥AtNHX1基因促进烟草对钾吸收的研究

提取拟南芥总RNA,反转录合成Na /H 逆向转运蛋白基因AtNHX1,构建了植物高效表达载体,用叶盘法将其导入烟草,经筛选获得了抗卡那霉素和GUS染色阳性的转化子38株.应用荧光定量PCR方法对转化材料部分含AtNHX1基因的烟草内源钾通道基因、烟草K 转运蛋白基因和烟草焦磷酸酶基因的转录水平进行了分析.结果表明:在转化烟草中可以检测到AtNHX1基因mRNA,与未转化材料相比,烟草钾离子转运蛋白基因NtHAK1的转录降低,H -ATPase基因NHA1转录增加,钾通道基因NKT转录无显著变化,T1代转化烟叶中K 含量显著增加,Na 、Ca2 无显著变化,烟叶中总糖含量降低,证明了编码拟南芥AtNHX1基因与植物的K 吸收有关.     

荧光假单胞杆菌G20-9拮抗烟草赤星病菌研究

在室内测定了荧光假单胞杆菌菌株G20-9对烟草赤星病菌的拮抗作用.结果表明,G20-9菌株的无菌发酵液对烟草赤星病菌丝生长量有较强抑制作用,抑制效果为82.1%,稀释2倍的无菌发酵液对茵丝生长的抑制效果优于化学杀茵剂菌核净.应用双抗标记法测定了G20-9菌株在烟草叶面和根际的定殖情况,结果表明,该菌可以在烟草叶面和根际定殖.     

烟草转基因检测方法的研究

通过试验研究,提出了烟草转基因检测方法和标准,首先提取样品DNA采用260－280nm波长扫描测定提取物DNA浓度和纯度,并利用叶绿体不编码蛋白基因序列PCR扩增确定模板质量,同时进行35s启动于,NOS终止子的PCR扩增,对于未出现特异性扩增的样品进行35s和NOS的巢式PCR反应,对于出现目标长度片段扩增的样品再次提取DNA重复检测,并利用限制性内切酶酶切、巢式PCR、探针杂交和目的基因序列扩增进行验证,确定所转目的基因种类。并应用竞争性PCR测定样品中转基因阳性成分含量。     

转TMV-cp基因烟草对环境影响的安全性研究

以转TMV-cp烟草品种NC89为试验材料,在温室和隔离圃中进行了转基因烟草对环境的安全性评价。试验结果未发现来自转基因材料中的外源基因飘移或整合到杂草、细菌、真菌和病毒上。      

暂时放下冠状病毒,说说烟草病毒

病毒是一种没有细胞结构的特殊生物,其结构非常简单,仅由蛋白质外壳和内部的遗传物质组成。当前冠状病毒肆虐全球,烟草中也一直有病毒病流行。我国已报道的烟草病毒病种类至少有16种,其中能够造成严重损失的主要有烟草普通花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒病(cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)等,它们使烟叶损失产量、降低质量,甚至绝收,严重威胁烟叶安全生产。目前我国烟叶生产主栽品种单一、尚无兼抗多种病毒的品种,药物防治效果也不甚理想,而且随着化肥的大量施用,植烟土壤变劣和连作障碍等问题也降低了烟株对病毒病的生理抗性,更加剧了烟草病毒病的威胁。     

应用0．3％科生霉素防治烟草赤星病研究

科生霉素可显著抑制赤星病菌孢子萌发，使其丧失萌发能力或产生畸形芽管，并能抑制菌丝生长，早期预防可延迟赤星病发病期１０天左右，病害发生后可有效控制病斑扩展和新病斑的产生。稀释倍数２００倍以内施用三次，防治效果在７０％以上。     

五个烟草野火菌株的生理小种鉴定

  背景和目的  针对目前国内尚未以国际通行的抗性鉴别宿主区分烟草野火菌的生理小种, 首次基于抗性遗传规律鉴定了所收集野火菌株的生理小种归属。  方法  通过大田喷雾接种、温室浓度梯度接种、无损伤接种及同一叶片上的对比试验等4个平行试验, 将ATCC11528等5个野火菌株接种到黄花烟等6个不同抗源遗传背景的烟草上, 根据不同试验出现的不同病理反应对各野火菌株进行生理小种分类。  结果  所收集的5个野火菌株经多轮分子标签鉴定纯化, 可用于接种试验。野火菌株D151、ZD和M109、ATCC11528和W11分别被鉴定为0、1、3等3个小种。  结论  采用国际通行的抗性鉴别宿主和4个平行接种试验区分了5个野火菌株的生理小种归属。为培育野火菌小种专化抗病烟草和克隆烟草中小种专化抗病基因提供了重要基础。      

黄花烟草K^＋通道基因NKC1克隆与序列分析

通过已知生物钾通道蛋白保守序列分析,设计兼并引物对钾饥饿处理的烟草幼根总RNA的反转录产物进行PCR扩增,分离到K^＋通道基因NKC1,该基因的cDNA阅读框由2481个核苷酸组成,编码的蛋白含有826个氨基酸（分子量为94.6KD）,等电点为6.60;将核苷酸序列输入NCBI进行BlastX其同源序列大部分为高亲和K＋转运体,与该基因同源性最高的是Solanum tuberosum钾通道基因SKT1,其氨基酸同源性为79%,预测该蛋白具有6个跨膜区域,采用同源模建方法预测了NKC蛋白活性区域的3维结构。同时,特异性转录分析发现NKC1基因在烟草幼根、叶片和花各器官均有表达,而以幼根组织中转录量最多;缺钾处理可显著诱导根系中NKC基因的转录,而高浓度NH4^＋处理对该基因的转录具有抑制作用,证实NKC基因在黄花烟草的钾吸收过程中起着重要作用。     

适于PCR分析的烤后烟叶DNA提取方法的研究

以８ 种方法提取烤后烟叶ＤＮＡ,测定其浓度和纯度,结合叶绿体不编码蛋白序列和３５Ｓ启动子序列的ＰＣＲ扩增结果来分析评价提取ＤＮＡ 的质量,同时讨论了这些提取方法的可靠性及所提取ＤＮＡ 的纯度和产量。     

3个黑龙江烟区烟草花叶病毒分离物的全基因组序列测定与分析

为明确黑龙江烟区烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到HEB1、HEB2和MDJ三个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,3个分离物全长均为6395核苷酸（GenBank登录号分别为MH595919、MH595920和MH595921）。HEB1和MDJ与辽宁分离物Beipiao（HE818412）一致率最高,分别为98.9%和99.6%;HEB2与云南分离物Chuxiong1（HE818417）一致率最高,为97.1%。HEB1是MDJ和HEB2的重组体。在根据全基因组序列构建的系统进化树中,TMV分为3个组,其中HEB1和MDJ均属I（U1）组,HEB2属Ⅱ（Rakkyo）组。TMV的4个基因均处于负选择,其中衣壳蛋白基因的选择压力最大。