PF7-5对烟草野火病的抑制及田间防治效果

为验证荧光假单胞杆菌PF7-5(CGMCC No.2069)对烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)的生防效果,设置了PF7-5对烟草野火病菌的室内抑菌及田间防治试验.结果表明,稀释5倍的PF7-5代谢产物室内对烟草野火病菌的抑制效果达96%,PF7-5活菌田间抑菌效果达91%.证实PF7-5对烟草野火病具有显著的拮抗作用和防治效果.     

烟草转基因内标准定量检测中竞争性模板的制备

以转基因烟草为材料，通过DNA提取、PCR扩增获得NOS终止子片段产物，以重叠延伸扩增法制备该片段的竞争性模板，并进行酶切验证。     

烟草转基因检测标准及PCR反应体系的研究

通过对PCR体系和反应条件的优化,确定了针对35s启动子序列进行转基因检测的最佳反应体系和反应条件,利用纯阳性模板经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳确认1ng模板DNA为纯阳性样品理想扩增下限,同时以不同阳性含量的干烟叶为材料,确定了烟叶转基因检测的标准为0.1%,建立了转基因外标定量法,并通过已知阳性含量样品的检测对该反应体系和检测标准进行了结果验证      

抗马铃薯Y病毒(PVY)和烟草花叶病毒(TMV)单联弱毒疫苗的研制及防效测定

为防治烟草马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）,筛选PVY和TMV基因组中保守且高效表达siRNA的片段,连接到烟草脉带花叶病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）弱毒侵染性克隆,制备成单联弱毒疫苗,获得TVB-PVYF1、TVB-PVYF2、TVB-PVYF3和TVB-TMVF1、TVB-TMVF2、TVB-TMVF3共6个单联弱毒疫苗。室内筛选后选取保护效果最好的TVB-PVYF2和TVB-TMVF3两个单联弱毒疫苗在山东临沂、潍坊和黑龙江哈尔滨等地进行了田间防效测定,TVB-PVYF2对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草PVY的相对防效分别为66.88%、76.46%和60.71%,TVB-TMVF3对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草TMV的相对防效分别为80.74%、87.34%和74.40%。      

根癌农杆菌介导的木霉菌遗传转化方法

利用根癌农杆菌介导转化系统，成功实现了丝状真菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的遗传转化，转化率约为60～190个转化子／10^6个孢子。PCR检测和Southern杂交分析表明，T-DNA已整合进木霉菌基因组中，而且大多都是以单拷贝的形式整合，转化子都能够稳定遗传。农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点，因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。     

黑龙江省烟草角斑病菌菌系分化研究

为明确黑龙江省烟草角斑病菌生理小种的遗传分化,本试验将在黑龙江省主要烟区采集到的19个烟草角斑病菌菌株通过针刺接种法接种到36个供试烟草品种上,通过对供试烟草品种病情指数的差异性分析和聚类分析,筛选了一套鉴定烟草野火病菌生理小种的鉴别寄主体系,利用这套鉴别寄主将19个供试菌株划分为5个生理小种。     

HAL1基因转化烟草提高烟叶含钾量研究

提取酿酒酵母总RNA进行RT-PCR反转录,根据HAL1基因(GeneID:856113)序列设计阅读框引物,对反转录产物进行PCR扩增,并进行全序列测定,构建筛选标记为带内含子的Km抗性基因的植物双元表达载体,经根癌农杆菌介导法将HAL1基因导入烟草品种龙江911和K326中,进行卡那霉素抗性筛选、GUS染色、目的基因扩增和HAL1基因mRNA荧光定量PCR检测,并对T1代各转化烟草材料烟叶含钾量进行化验分析。测序结果证实PCR扩增得到的DNA与酿酒酵母HAL1基因序列相同,获得抗卡那霉素、GUS阳性的转化植株12株。经PCR扩增检测证实HAL1基因已整合入转基因烟草的基因组,荧光定量PCR分析结果表明HAL1基因已在烟苗根系表达,烟叶含钾量化验结果证明HAL1基因可使烟叶含钾量提高30%。