枯草芽孢杆菌产原果胶酶发酵条件研究

原果胶酶(Protopectinase)是可以催化原果胶水解的酶类,广泛用于果胶生产、单细胞食品制备和棉织品的生化精炼之中。实验对影响枯草芽孢杆菌XZ2(BacillussubtilisXZ2)摇瓶发酵生产原果胶酶的相关因子:豆粕粉的水提时间、水提液浓度、磷酸盐浓度、金属离子、发酵培养基初始pH值、接种量和接种龄等采用单因素试验进行了研究,在单因素试验基础之上,选取pH、接种量、Mg2 、磷酸盐和转速等因素进行正交试验,结果表明发酵培养基初始pH和磷酸盐缓冲液浓度对产酶影响显著。当发酵初始pH7.5,接种量10%,MgSO4·7H2O0.04%,磷酸盐缓冲液浓度为0.20mol/L,摇床转速为120r/min的摇瓶发酵条件下,产酶酶活最高为16.71U/ml。     

复合诱变选育表面活性素(surfactin)高产菌株

为筛选抗菌脂肽表面活性素高产菌株,以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis fmbJ224为出发菌株,先后采用氯化锂(LiCl)、亚硝基胍(NTG)、甲基磺酸乙酯(EMS)和链霉素(streptomycin)进行复合诱变。结果表明：经初筛、复筛选育得到1株高产抗菌脂肽菌株LN2-3,其Surfactin产量达到239.2mg/L,比出发菌株Bacillus subtilis fmbJ224(5.25mg/L)提高了44.56倍,且该菌株具有良好的遗传稳定性。提示采用LiCl-NTG复合诱变能较大幅度的提高诱变率,可以获得抗菌脂肽高产菌株。     

鸡腿蘑发酵液中抑制非酶糖糖基化反应活性物质的分离及分析

以体外非酶糖基化抑制率为主要检测指标,对鸡腿蘑发酵液中抑制非酶糖基化反应具有较高活性的物质进行了初步的分析与分离,经过AB-8大孔树脂和C18反相柱的多次分离,获得一种具有高非酶糖基化反应抑制活性物质鸡腿蘑素(Comatin),经HPLC-MS分析其相对分子质量为168.在2 mg/mL质量浓度条件下,体外非酶糖基化抑制率达到95.86%,半抑制质量浓度IC50为0.39 mg/mL,体外实验初步分析鸡腿蘑素可能与蛋白质某一位点结合,且这种结合是在己二醛与牛血清白蛋白结合之后.     

谷氨酸脱羧酶活力测定中GABA比色定量方法研究

建立了谷氨酸脱羧酶活力测定中γ-氨基丁酸比色测定方法,该方法灵敏度高、精确性和重现性好。测定程序为:取酶反应液0.4ml,加入Na2CO3(1mol/L)0.1ml、pH10.0硼酸盐缓冲液(0.2mol/L)0.5ml、6%苯酚1ml,混匀,于室温下(20℃)在5min内加入5.2%NaClO溶液1ml,混匀后放置4～8min,然后沸水浴l0min,立即冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入2.0ml60%乙醇溶液,混匀后于20℃水浴中放置20～40min,测定640nm处的吸收值。经采用比色法和高效液相色谱法对谷氨酸脱羧酶酶反应液进行测定,两种方法的测定结果相对误差为4.91%。     

鲜切甘薯高效化学褐变抑制剂组合的筛选

试验筛选了鲜切甘薯能取代亚硫酸盐的化学褐变抑剂组合,分析了其对甘薯贮藏期间PPO活性和褐变度的影响。研究结果表明0.2%L-Cys+0.30%CA+0.15%EDTA-2Na+0.30NaCl组合抑制褐变效果最好,各因素对鲜切甘薯抑制褐变效果的主次顺序为A>B>C>D。该褐变抑制剂组合能够显著抑制鲜切甘薯贮藏期间PPO活性,对鲜切甘薯组织的褐变有明显延缓作用。     

Bacillus amyloliquefaciens ES-2液体发酵抗菌脂肽培养及其主要影响因子筛选

对淀粉液化芽孢杆菌ES-2抗菌脂肽深层液体发酵培养基及其主要影响因子进行了筛选.首先采用单因子实验,确定了Landy培养基为起始培养基,再采用Plaekett-Burman设计法,对影响抗菌肤发酵的显著因素进行筛选.结果表明,在所选取的12个相关因素中,对抗菌肽的产量具有显著影响的因子是KC1、FeSO4、温度.     

具有抑制肠道致病菌和黏附Caco-2细胞作用的益生性乳酸菌的筛选及鉴定

为了筛选具有肠道益生特性的乳酸菌,进一步开发益生菌资源,本文研究采用牛津杯、人工模拟胃肠液及体外黏附Caco-2细胞等方法,以鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)为对照菌株,对实验室保藏15株乳酸菌的益生特性进行筛选与评估。实验结果表明:15株乳酸菌对两株沙门氏菌都具有一定抑制效果,抑菌圈直径为10.95~22.06 mm;乳酸菌C174、D24、D599、C37、D512具有较好的耐酸耐胆盐能力,在人工胃液3 h内存活率达到60%以上,人工肠液4 h内存活率达到80%以上;在黏附试验中,C174对Caco-2细胞具有较强黏附能力,黏附数量为740 CFU/100细胞,略高于对照菌株鼠李糖乳杆菌(543 CFU/100细胞);通过对具有高黏附性的菌株C174进行生理生化和16S rRNA分子测序鉴定,结果表明菌株C174为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),命名为Lactobacillus plantarum ZJ-174。Lactobacillus plantarum ZJ-174的抑菌能力强、能够耐酸耐胆盐,并具有很强的黏附能力,是一株潜在的益生菌,具有治疗或预防人和动物肠道疾病等应用价值。     

GC-MS法测定煎炸食品中反式脂肪酸含量

本文建立了气相色谱-质谱法测定煎炸食品中反式脂肪酸含量的分析方法,油脂提取、皂化及甲酯化后,经DB-225ms毛细管柱分离,采用质谱全扫描方式外标法定量。结果表明：该方法快速、准确、分离良好,在10—100μg／mL浓度范围内线性良好,各反式脂肪酸组分检出限为0．03g／100g,含量测定的相对偏差均小于1O％,加标回收率在85．3％-91．8％之间,可作为检测煎炸食品中TFA含量的推广方法。     

大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒的组建及活菌检测

该研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒,对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估,并在组建试剂盒的基础上,利用叠氮溴化丙锭(PMAxx)对活/死细胞的选择性,构建了大肠杆菌O157:H7活菌定量检测技术。结果显示,试剂盒特异性强,仅大肠杆菌O157:H7血清型有阳性扩增;最低检测限为84CFU/m L;在四种常见食源性致病菌干扰下能准确检测出大肠杆菌O157:H7;在人工污染食品样品的实际检测中,可检测到初始污染量为7.97×10⁰CFU/m L的样品;通过单因素变化试验对PMAxx处理的各项参数进行优化,确立了曝光时间11 min、暗孵育时间20min、PMAxx浓度30μmol/L的最优反应体系,并与本研究组建的实时荧光定量PCR试剂盒相结合,建立了在3.4×10⁷-3.4×10²CFU/m L浓度范围内Ct值与菌液浓度线性关系良好的大肠杆菌O157:H7活菌定量检测方法,为食源性致病菌快速定量检测提供技术支持。     

生姜多糖的提取及其对糖尿病小鼠肠道菌群的调节作用

目的:研究生姜多糖对高脂饮食（High-fat diet,HFD）和小剂量链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）联合诱导的2型糖尿病（Type 2 diabetes,T2D）小鼠肠道菌群的调节作用。方法:采用热水浸提乙醇沉淀的方法,从生姜中提取出多糖,通过单因素实验和正交试验优化提取条件,随后选择最佳的脱蛋白方法得到生姜多糖（Ginger polysaccharide,GP）,并通过测定GP对2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二铵盐（2,2'-Azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）,ABTS）自由基和羟基自由基的清除能力,评价了其体外抗氧化能力。随后,通过高脂饮食和STZ建立2型糖尿病小鼠模型,测定各组小鼠的空腹血糖（Fasting blood glucose,FBG）浓度和糖化血清蛋白（Glycated serum protein,GSP）水平,采用16S rRNA高通量测序技术分析糖尿病小鼠的肠道菌群组成。结果:GP最优提取工艺为料液比1:20 g/mL、提取温度90 ℃、提取时间1 h;采用Sevag试剂处理5次进行脱蛋白得到GP,得率为2.91%±0.25%,其中GP中总糖含量为43.44%±0.99%;当GP浓度达到4 mg/mL时,GP对ABTS＋自由基和羟基自由基的清除率分别为66.09%和65.73%;在GP的干预下,显著降低了糖尿病小鼠FBG浓度和GSP水平（P<0.05）,16S rRNA测序结果表明,GP改变了糖尿病小鼠的肠道菌群组成和相对丰度,增加了阿德勒克氏菌属（Adlercreutzia）、阿克曼菌属（Akkermansia）和乳酸杆菌属（Lactobacillus）等有益菌的相对丰度,降低了普雷沃氏菌属（Prevotella）等有害菌的相对丰度。结论:通过热水浸提法提取和Sevag脱蛋白所得生姜多糖能改变糖尿病小鼠肠道菌群的组成,该研究结果为生姜多糖预防和治疗T2D提供了理论依据。