休哈塔假丝酵母发酵木糖生产乙醇的研究

木糖发酵是木质纤维素发酵的关键,休哈塔假丝酵母是自然界木糖发酵性能较好的天然酵母之一.研究了装液量、转速、木糖浓度、有机氮源等条件对休哈塔假丝酵母CICC 1766发酵木糖生产乙醇的影响,探讨休哈塔假丝酵母的乙醇耐受能力.结果表明,休哈塔假丝酵母对酒精的耐受能力达3%vol.在28℃,初始pH值5.0,160 r/min,250 mL三角瓶装液量150 mL,木糖浓度60 g/L,玉米浆0.5%(v/v),含尿素0.024%的条件下,休哈塔假丝酵母发酵木糖能产乙醇20.52 g/L,得率达到理论值的74.5%.     

抗老化啤酒酵母菌株的诱变选育

谷胱甘肽（GSH）在啤酒中具有抗老化作用,选育高产谷胱甘肽的啤酒酵母菌株有助于改善啤酒抗老化性能。以啤酒酵母S5为出发菌株,经紫外诱变和硫酸二乙酯（DES）诱变后,获得突变株SC67,其GSH胞内生成量为15．238mg／L,胞内含量为11．292mg／g,较S5分别提高91．4％和57．8％。SC67发酵所得啤酒中胞外谷胱甘肽含量（6．43mg／L）较S5（1．35mg／L）显著提高,啤酒抗氧化性能得到明显改善,DPPH自由基清除率较s5提高1312％;TBA值下降7．1％;RSV值提高49．2％。     

木糖发酵酵母Pichia stipitis木糖还原酶基因XYL1在酿酒酵母中的表达

通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖还原酶 (XR)基因XYL1。将该基因连入酵母表达载体pYX2 12的强启动子磷酸丙糖异构酶 (TPI)启动子下 ,得到融合表达载体pYX XYL1。通过电转化方法将 pYX XYL1转入酿酒酵母SaccharonmycescerevisiaeW 30 3-1A中 ,酶活测定表明 ,在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖还原酶 (XR)基因XYL1得到活性表达 ,2酿酒酵母转化子粗酶液中木糖还原酶活分别为 0 .89U/mg(蛋白 )和 0 .83U/mg(蛋白 ) ,为供体菌的 1 5倍多。与基因供体菌不同 ,木糖还原酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导 ,为组成型表达。树干毕赤氏酵母木糖还原酶 (XR)基因XYL1的成功表达为后续的利用木糖的酿酒酵母菌株的构建奠定了基础     

高耐性酿酒酵母的杂交育种

利用不同特性的酿酒酵母AY-15,M1进行生孢培养和孢子分离试验,得到185株产酒、153株耐渗单倍体。其接合型,a型约占1／4,仅型占约1／2,其余为不确定株。经筛选试验后得到13株产酒性能良好的单倍体和19株耐渗性能良好的单倍体。利用酒精发酵试验进行复筛,得到两株性能最优良的单倍体,作为杂交试验的亲本。杂交试验后,经耐渗、耐酒精杜氏管试验和发酵性能测定,得到一株能够在高渗环境中仍然保持较高产酒精能力的酿酒酵母,在含盐5％的培养基中发酵产酒精能力分别比AY-15,M1提高19．6％和15．4％。     

低产硫化氢啤酒酵母菌株的选育

啤酒酵母出发菌株S-5经紫外诱变后,以醋酸铅平板初筛,后经在不同硫源平板上培养筛选,再经啤酒发酵复筛,最终获得一株低产硫化氢的啤酒酵母突变株M8.结果表明,突变株M8的二氧化硫生成量为30.4 mg/L,硫化氢生成量为4.6μg/L.与出发菌株相比,M8硫化氢生成量下降了78.2%.     

中国固态发酵白酒中功能细菌研究进展

细菌是白酒酿造3大类微生物之一,其在白酒生产中有着重要的作用,如:芽孢杆菌、乳酸菌、放线菌和梭菌等,它们能产生酯类、有机酸、吡嗪、萜烯等微量成分,从而影响白酒的风味与品质。基于细菌在白酒中的重要功能以及微生物分离培养技术和分析检测技术的进步,近年来相关研究越来越深入。该文综述了近年来白酒功能细菌的研究进展,介绍了酿酒各个环节中主要功能细菌及其在白酒中的作用,旨在为白酒功能细菌的研究提供参考。     

硫酸二乙酯化学诱变选育高核糖核酸酿酒酵母及培养基组成优化

该研究以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）BY23为出发菌株,采用硫酸二乙酯（DES）对其进行化学诱变,筛选出一株生长性能好、胞内核糖核酸（RNA）含量高的突变株BY23-195,并以胞内RNA含量为评价指标,通过单因素及正交试验对其糖蜜培养基成分进行优化。结果表明：突变株BY23-195生长性能较好,在酵母浸出粉胨葡萄糖（YEPD）培养基中,RNA含量较出发菌株BY23提高了18.85%。最优糖蜜培养基组分为糖蜜（糖度调至12 °Bx）、酵母浸粉5%、硫酸铵0.05%、磷酸二氢钾0.05%、硫酸亚铁0.05%、硫酸锌0.10%。在此最优培养基组成下,突变株BY23-195胞内其RNA含量达到16.01%,较优化前（13.66%）提高了17.20%。     

老白干香型白酒酿造微生物菌群及其与微量成分的关系

利用高通量测序技术对老白干香型白酒酿造过程中的微生物进行测序,并对得到的有效数据进行α、β多样性分析,得到310个细菌属和59个真菌属,其中优势细菌属为Lactobacillus、Pediococcus和Weissella,优势真菌属为Saccharomycopsis、Issatchenkia、Rhizopus、Trichosporon、Candida和Aspergillus。采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术检测并定量酒醅中的微量成分,对检测到的微量成分进行热图绘制。结果表明:0~3 d是微量成分种类增加的一个小高峰;3~14 d微量成分种类变化较小,大部分微量成分含量增加;14~21 d大量酯类物质合成;21~30 d微量成分增速逐渐减小。通过计算微生物与微量成分之间和微生物与微生物之间的Spearman相关系数,分析得到对微量成分具有一定贡献老白干酒酿造核心微生物群为:Lactobacillus、Bacillus、Fusarium、Staphylococcus和Thelebolus。     

乙醛脱氢酶基因过表达酿酒酵母在黄酒中降高级醇作用

为降低黄酒中高级醇产量,以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）单倍体菌株AY12α为出发菌,利用同源重组技术构建乙醛脱氢酶基因过表达菌株,并在不同黄酒发酵工艺下探究其对酿酒酵母产高级醇的影响。结果表明,成功构建了5株乙醛脱氢酶基因（ALD2、ALD3、ALD4、ALD5和ALD6）过表达菌株,在大米加麦曲的传统黄酒发酵工艺下,所有改造菌株均可以促进乙酸、降低高级醇的生成,其中改造菌株α-ALD6效果最显著（P＜0.01）,乙酸产量是出发菌AY12α的2.92倍,总高级醇产量下降72.04%。在不同发酵工艺中,改造菌株α-ALD5与α-ALD6均可显著促进乙酸、降低高级醇生成（P＜0.01）;在纯种根霉曲做糖化剂的发酵工艺中,改造菌株在培菌糖化24 h后接入降高级醇效果更好。与纯种根霉曲相比,改造菌株以麦曲作糖化剂时降高级醇效果更好,且改造菌株α-ALD6在大米加麦曲的传统黄酒发酵工艺下降高级醇效果最好。     

GC-MS测定白酒中氨基甲酸乙酯的不同预处理方法的比较

比较了固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、双水相萃取(LLE)作为预处理方法萃取白酒中氨基甲酸乙酯的效率,并联合气相色谱-质谱(GC-MS)对白酒中氨基甲酸乙酯进行测定,通过方法学验证评价各方法的准确度和精密性。结果显示:对于三种香型的白酒来说,SPE-GC/MS法检测精密性最好(1.77%~2.96%)、准确度最高(回收率89.73%~103.51%),检测限最低(1.12μg/L);SPME-GC/MS方法检测清香型白酒的效果优于LLE-GC/MS;LLE-GC/MS方法检测浓香型、酱香型白酒效果优于SPME-GC/MS方法。综合考虑各因素,LLE-GC/MS因其准确度较高、精密度较好、简便快速、成本低经济、有机溶剂用量少环保、易于掌握,满足一般性定量检测要求,适合用于我国白酒中氨基甲酸乙酯含量的常规分析检测。SPE-GC/MS准确度高、精密度良好,但由于操作过程繁琐、成本高、有机溶剂用量多不环保,适用于精密分析。