双启动子双报告基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞内进行表达。方法分别以pEGFP-N1和pDsRed-N1为模板,PCR扩增EGFP和DsRed基因,插入表达载体pCI中,分别构建重组表达质粒pCI-EGFP和pCI-DsRed,利用载体上BglⅡ和BamHⅠ为同尾酶的特点,将两个表达质粒酶切后拼接,构建双启动子双报告基因重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP,转染293T细胞,荧光显微镜观察EGFP和DsRed的表达,Western blot和流式细胞术检测EGFP和DsRed蛋白的表达。结果重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP经酶切鉴定和测序证实构建正确,两启动子为顺向相连;EGFP和DsRed蛋白在293T细胞中可同时正确表达。结论成功构建了双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞中表达,为实现两种外源基因在真核细胞内的同步表达及示踪提供了有效的分子工具。     

人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制

筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白.经摇瓶及5L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件.经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L.离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化.纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测.筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件.纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95％,相对分子质量为85821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符.内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求.体外生物细胞活性高达1.6×106 IU/mg.具有良好的工业应用价值.     

红曲桔霉素样品预处理的探讨

探讨了采用HPLC分析红曲样品中桔霉素的样品预处理方法。对于红曲液态发酵产物 ,采用热酒精直接萃取的效果优于其他溶剂 ;对于红曲固态发酵产物 ,采用V(甲苯 )∶V(乙酸乙酯 )∶V(甲酸 ) =7∶3∶1(简称TEF - 7∶3∶1)为萃取剂 ,用超声波萃取 3次后 ,桔霉素的萃取效率最高 ,同时萃取的红曲色素最少 ;在 0 .1～ 10mg/L范围内 ,加入标准桔霉素的回收率达 87%以上。     

反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定啤酒中有机酸

建立了一种利用反相高效液相色谱法同时测定啤酒中 9种有机酸的方法。应用反相C18色谱柱Nucleosil 10 0C18　 2 5 0× 4 0mm ,以 0 1mol/LKH2 PO4(用H3 PO4调 pH3 0 )为流动相 ,紫外检测 2 15nm ,将啤酒中草酸、丙酮酸、苹果酸、α 酮戊二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸一次性分离。除柠檬酸外各种有机酸的回收率在 85 %以上 ,变异系数 <5 %。该方法简便、快速、准确。此外 ,对影响有机酸分离的因素进行了研究 ,并测定了国内市售的十几种啤酒中的有机酸含量     

用于煤矿自燃火源定位的WSN节点研究

给出了一种用于煤炭自燃定位的WSN设计,讨论了传感器节点的设计原则,重点研究了节点的硬件结构,并详述了网络协议。定位系统的核心部件由MSP430微处理器、CC2420射频芯片、DZW-T1温度传感器等组成,网络层采用多路径负载均衡技术的路由机制,数据链路层选择S-MAC协议。与传统的监测系统相比,设计的系统结构灵活、可扩展性强、测量准确,为煤炭自燃火源定位技术研究拓宽了方向。     

低产桔霉素红曲霉菌种筛选

对部分红曲霉菌种的液态发酵液和固态红曲米中桔霉素质量分数进行了测定 ,从中筛选了数株低产桔霉素的红曲霉菌种 ,重点对红曲霉ZK0A菌种生产的红曲米的色价及桔霉素质量分数进行了测定 .连续培养 3批该菌种 ,所生产的红曲米色价高于 10 0 0U / g ,桔霉素质量分数低于5mg/kg.而另一株红曲霉ZH 12生产的红曲米 (色价 170 0U/ g)中桔霉素质量分数则高达 1g/kg以上 .对这两株红曲霉菌种的菌落形态进行了鉴定 ,初步认定这两株菌种都是紫色红曲霉 .     

TLC及HPLC测定红曲产品中的桔霉素

阐述了定性及定量测定红曲产品中桔霉素含量的几种方法.采用板层析（TLC）,在点样量为1mL、点样长度5cm条件下通过目视法,标准桔霉素溶液的最低检测质量浓度可达0.2mg/L,板层析可作为定性检验红曲产品中桔霉素的简便方法.根据红曲样品预处理方法及HPLC检测器的不同,确定了两套准确可靠的定量检测方法.高效液相色谱结合荧光检测的最低检测限为0.60ng.HPLC上样液最低可检测的质量浓度为0.1mg/L.在0.1～10mg/L的质量浓度范围内,标准桔霉素溶液的质量浓度与峰面积的线性关系良好,达到R2=0.998.红曲样品桔霉素的测定结果重复性较好.     

深化品牌底蕴 提升品牌形象——名石实施CI新战略 全面提升品牌

广州“名石”宝玉石品牌，从2005年选择“超级女声”冠军安又琪代言人开始，其独特的营销手法聚焦了行业的目光 ，快速的加盟速度，让这家企业仅成立2年多就在全国拥有了近300家加盟店。     

基于CC1100的心电遥测系统设计与实现

介绍了一种采用CC1100芯片设计的心电信号无线收发系统,详细地给出了系统的软硬件设计.该系统具有体积小、功耗低、成本低和信号高保真等特点,同时也实现了心电监护仪中信号采集与分析处理的分离,具有很好的应用价值.     

一种指纹图像奇异点检测的方法

准确、可靠地检测奇异点(core点和delta点),对指纹分类和指纹匹配具有重要的意义.针对低质量指纹图像奇异点检测中精确定位和可靠性判断的难题,提出了一种检测指纹奇异点的方法.首先,对于一幅指纹图像,在同一分块尺寸下进行多次图像错位分块,并且分别在不同的图像错位分块情况下检测指纹的奇异点,得到区域相对集中的奇异点位置的集合,并计算其质心,以精确地确定奇异点的位置.然后,再在不同的分块尺寸下检测奇异点,并进一步判断上一步所检测到的奇异点的真伪.该方法利用了多次图像错位分块检测的奇异点位置相对集中和各级分块尺寸下检测的奇异点位置相互关联的特性,能够从指纹图像中较精确、可靠地检测出奇异点.在部分典型低质量指纹图像上的实验结果验证了该方法的有效性,对低质量指纹图像具有良好的鲁棒性.