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为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm.序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成.突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA).重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株.IPTG诱导后,二者均得到了表达.软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3%,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8%;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量. 相似文献
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杨开国 《制冷空调与电力机械》2003,24(3):64-67
分析了CFH-Ⅱ型翻车机传动齿轮轴承座的座脚螺栓组联接失效(松动)的原因,得出控制和保证合适的螺栓组联接预紧力是防止螺栓联接失效(松动)的关键;依据现场条件,对座脚螺栓进行了设计改进;提出了一种适合现场使用的螺栓预热伸长的装配方法,经实践验证此法是简单可靠的装配方法。 相似文献
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电位器式远传压力表,目前尚无计量检定规程。本文是我们实际检定工作中的体会,重点的关于信号基本误差和远传压力指示调节仪的检定。 相似文献
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本文介绍电梯困梯救援装置设计机理及采用8031单片机控制的方法,并给出了系统硬件和软件的实现框图。 相似文献