重组大肠杆菌产卤代烷脱卤酶的发酵条件优化

对产卤代烷脱卤酶的重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET28a-DhaA进行发酵优化以提高其表达量。该研究从TB培养基出发,通过单因素实验与响应面实验在摇瓶水平上对培养基各成分进行优化;其次,在最优培养基的基础上对发酵的工艺条件进行优化;最后,在5 L发酵罐中进行了初步放大验证。结果表明,最优的培养基组成为：甘油10 g/L,酵母粉23 g/L,蛋白胨14 g/L,MgSO₄·7H₂O 1.3 g/L,ZnSO₄·7H₂O 0.1 g/L,酶活力可达到（1 182.94±10.86） U/L,较初始培养基提高了94%;最优的发酵工艺条件为：接种量5%,装液量40 mL/250 mL,37℃培养至OD₆₀₀为1.8时加入终浓度为0.4 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷于20℃诱导22 h,酶活力可达到（3 585.83±15.02） U/L,提高至未进行优化前的5.87倍;5 L发酵罐初步放大验证实验中,酶活力最高达到（9 682.62±191.16） U/L,提高至摇...     

氨基化大孔硅胶共价固定 Pancreas porcine 脂肪酶的研究

本研究以大孔硅胶为材料,对其进行环氧基和氨基两步活化,然后利用碳化二亚胺（EDC）将氨基化硅胶与Pancreas porcine脂肪酶（PPL）进行共价固定化。通过优化固定化条件,在EDC与蛋白摩尔比为50：1;载体与粗酶质量比为10：1,固定化pH为6.0, 固定化时间为8 h的条件下获得最大固定化酶酶活为86.67 U/g,远远高于未修饰硅胶物理吸附固定PPL所得固定化酶酶活（33.33 U/g）。此外,本文还利用扫描电镜（SEM）和傅立叶变换光谱仪（FT-IR）对固定化前后硅胶进行了结构表征,固定化后硅胶表面出现明显的丝状蛋白,且固定化酶在1543 cm-1处出现酰胺Ⅱ带,说明PPL成功共价固定于氨基化硅胶上。通过对所得固定化酶性质进行分析,结果表明,固定化酶最适反应pH向碱偏移一个单位,最适反应温度提高了5 ℃,热稳定性明显提高。     

重组表达D-泛解酸内酯水解酶乳酸克鲁维酵母的发酵工艺优化

以前期构建的重组表达D-泛解酸内酯水解酶的乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)GG799为对象,在5 L发酵罐中,基于考察pH、搅拌转速、接种量3种单因素条件对产酶的影响结果,进一步优化补料策略,初步确定了促进重组D-泛解酸内酯水解酶高效表达的补料发酵方式。单因素条件研究结果表明,当pH 6.0、搅拌转速300 r/min、接种量2%时,可以获得最高表达水平,酶活力达5.12 U/mL,较摇瓶最佳结果提高了2倍。补料发酵研究表明,当通过补料维持发酵液恒糖质量浓度为5 g/L时,酶活力可达到8.20 U/mL,较分批发酵酶活力提高了60.1%;当分批发酵结束后,以恒速5 g/h进行补料,酶活力最高可达10.70 U/mL,较恒糖补料方式酶活力提高了30.5%,较分批发酵酶活力提高了98.6%。通过分批发酵和补料分批发酵的研究,显著提高了D-泛解酸内酯水解酶的酶活力,为进一步放大生产奠定了基础。     

高密度培养重组E-coli产胆固醇氧化酶的乳糖诱导策略

研究了乳糖诱导重组大肠杆菌表达胆固醇氧化酶。结果表明,乳糖不仅可以作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长。通过对诱导条件的优化,实现了重组大肠杆菌的高密度培养,最高密度达68.9(OD600);在此基础上确定了最佳的诱导时机为发酵中期,菌体产酶水平达6005.66U/L,生产强度为200.19U/L.h,实现了胆固醇氧化酶的高效生产。      

日立ZAXIS 55UR

2003年夏天,日立的革命性挖掘机ZAXIS55UR在中国闪亮登场.日立此次推出的后方超小回转式微型挖掘机ZAXIS 55UR在日本国内经过了多年的实践考验并针对中国市场进行了相应改进,使其施工范围进一步扩大并能缩短施工工期.     

保护剂对胆固醇氧化酶稳定性机理的研究

利用荧光光谱、圆二色性光谱及凝胶电泳等方法,研究液态胆固醇氧化酶失活机理。根据失活机理,选择添加两种不同保护剂提高酶稳定性,研究提高酶稳定性的机理。37℃下,添加15%甘油的液态酶稳定性较佳,45 h后酶活保留率提高58%,核黄素对酶基本无保护作用。经研究分析,甘油主要通过有效抑制分子间聚集,维持二级结构,增强酶稳定性;核黄素不能抑制酶自身聚集,对酶保护作用不明显。     

好氧反硝化芽孢杆菌JD-014的分离鉴定及脱氮性能

为了更好地实现以绿色环保的方式处理食品工业废水中的氮素污染物,从某河道水体中分离筛选出了1株具有好氧反硝化功能的芽孢杆菌JD-014。通过对该菌株在脱氮过程中气态氮(N₂)的产生、氮平衡估算以及酶活测定证实了菌株JD-014的好氧反硝化途径,并对影响其脱氮性能的环境因素进行了研究。结果表明:以50 mg/L NO₃^--N为唯一氮源时,菌株JD-014对NO₃^--N的去除速率为0.56 mg/(L·h)。在脱氮过程中,该菌株可将NO₃^--N部分转化为N₂并伴随有相关功能酶活的检出;当碳源为丁二酸钠和柠檬酸钠、碳氮比(C/N)为10~25、温度为37℃、转速为150~200 r/min、盐度为1%以下时,该菌株脱氮性能最佳。此外,菌株JD-014还具有较好的亚硝酸盐耐受性,在NO₂^--N质量浓度为10~200 mg/L时,脱氮率可保持在46.62%~99.92%。本研究表明,好氧反硝化芽孢杆菌JD-014在实际食品加工废水的氮素污染生物处理方面具有很大的应用潜力。     

多聚赖氨酸对双亚基肌酸酶表面的修饰

利用多聚赖氨酸(poly-lysine)对同源二聚体肌酸酶进行化学修饰,研究该法对酶稳定性的影响。选用L_9(3~4)正交试验方案,研究不同修饰条件对修饰酶的催化效率和热稳定性的影响,确定多聚赖氨酸修饰肌酸酶(CRE)的最佳条件为CRE-COOH与poly-lysine-NH_2、EDC的摩尔比分别为1∶100和1∶10,pH为7.0。通过SDS-PAGE鉴定,探测多聚赖氨酸可在酶分子表面产生共价结合。修饰酶的催化动力学参数Km和kcat分别为4.75×10~(-2)mol/L和2.50×10~2S~(-1)。与游离酶相比,修饰酶的热稳定性和pH稳定性均明显提高。修饰酶比游离酶的Tm值高了2.07℃,当pH值为4.0和10.0时,修饰酶的酶活力仍保留在50%以上,而游离酶活性几乎丧失。进一步优化研究表明,多聚赖氨酸表面修饰法有可能成为有效提高肌酸酶稳定性的一种方法。     

强化交联促进透明质酸凝胶的抗酶解能力

为了强化透明质酸凝胶抗酶解能力,开发了初次交联-强化交联的偶联制备模式,并通过正交试验来确定最佳的交联条件。通过化学发光法测定透明质酸酶降解透明质酸凝胶后得到的产物,并由此计算凝胶的降解率。通过气相色谱法测定凝胶酸解后甘油含量并计算交联度。此外,检测了强化交联对透明质酸凝胶细胞毒性、遗传毒性以及溶血毒性的影响。结果表明,经过强化交联后(最优条件:35℃,0.05 mol/L NaOH,1.5 h,透明质酸单体/交联剂比例8∶1)。此后24、48、72 h降解率分别由初次交联后的9.76%、16.79%、20.45%到降低至强化交联后的6.85%、7.56%、12.4%;交联度由初次交联后的16.53%上升到强化交联后的54.52%。此外,强化交联后的凝胶在毒性检测中细胞毒性维持在1级,无明显致突变性,溶血度符合一般生物材料安全要求。     

分离谷胱甘肽D840树脂的筛选研究

采用D201、201×7、D354、D840、D001、001×7六种树脂,对从啤酒酵母中抽提的谷胱甘肽超滤样液进行静态吸附比较,筛选出D840树脂的吸附容量最高;并初步研究了树脂的洗脱,在1mL/min的流速下,用0.3mol/L的盐酸洗脱,收集洗脱液中谷胱甘肽,回收率为72.08%,纯度为50.5%。