抗人GPA~N单克隆抗体的制备及鉴定

目的　制备抗GPA单克隆抗体以建立“GPA体细胞突变分析法”。方法　用O ,N型人红细胞 ,以及纯化人GPAN 免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备 ,用细胞凝集、间接免疫荧光筛选 ,用ELISA、Westernblot、酶处理红细胞的间接免疫荧光标记鉴定。结果　获得抗GPAN 单克隆抗体 6A8杂交瘤细胞系。其单抗属lgG3亚类 ,λ型轻链 ,识别和结合GPAN 氨基端 1～ 8位决定位点 ,对糖链依赖。流式细胞分选结果显示 6A8特异结合二甲亚胺固定的人MN和N型红细胞。结论　对分析由于基因突变和糖基化变异所致N ,MN红细胞GPAN 突变有理论研究和应用价值。     

人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位分析及验证

目的分析人VEGF165和小鼠VEGF164的共同抗原表位,为血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表位疫苗的设计和验证奠定基础。方法分析人VEGF165和小鼠VEGF164蛋白与KDR结合的关键位点,确定其共同表位。将共同表位插入到VEGF骨架蛋白中,扩增含共同表位的骨架蛋白基因,与原核表达载体pET-24a连接,构建重组表达质粒pET-24a-FV,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Sephacryl S-100凝胶柱进行纯化,纯化的蛋白进行SDS-PAGE分析。以纯化的表位展示蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA法测定血清效价,Western blot和间接免疫荧光法检测免疫小鼠血清对小鼠VEGF164和VEGF165的识别。结果人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位为KDR 40s loop结合区的EYPDEIEYIFKP;重组表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表位展示蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20%,纯度可达92%;小鼠VEGF164和人VEGF165均能与小鼠免疫血清发生反应,血清效价达到1∶104;免疫血清不仅能识别表位展示蛋白,还能识别小鼠VEGF164和人VEGF165单体和二聚体,还可与人HeLa、小鼠B16肿瘤细胞之间存在阳性反应,表明表位展示蛋白能展示VFGF的共同抗原表位。结论骨架蛋白展示的VEGF164和VEGF165共同表位免疫小鼠后,能产生针对这两个蛋白的特异免疫反应,证实EYPDEIEYIFKP表位是VEGF164和VEGF165的共同抗原表位。     

基因转染结合局部照射对体内黑色素瘤的抑制作用 :肿瘤的基因—放射治疗策略(英文)

探讨OSM对黑色素瘤体内生长的抑制作用及其在基因 -放射治疗中的应用。将人OSMcDNA插入 pCI-neo构成OSM表达质粒 ( pO) ;Egr- 1基因调控序列 (Egr - 1R)连接于OSMcDNA上游构成辐射诱导性OSM表达质粒 ( pEO)。pO和 pEO转染小鼠B1 6黑色素瘤细胞 ,筛选出OSM表达细胞 ( pO - 1 7和 pEO - 1 ) ,皮下接种C5 7小鼠 ,观察和比较相同生长期内瘤体重量及给予60 Coγ射线局部照射后肿瘤抑制率的变化。结果表明 ;在未照射实验中 ,pO - 1 7和 pEO - 1细胞接种 2 0d后的瘤体重量较对照组明显降低 ;在照射实验中 ,pEO- 1细胞照射后 7d瘤体重量的下降最为显著 ,肿瘤抑制率较未照射时提高 42 3%。说明转基困分泌的OSM可对瘤细胞的体内生长产生抑制 ;γ射线可通过Egr - 1R增强OSM表达的途径 ,加剧对肿瘤的抑制 ,体现出基因 -放射治疗的效果     

钢管桩和预应力管桩的极限抗拔破坏试验研究

开展了钢管桩和预应力管桩的单桩竖向抗拔破坏试验,尝试得到抗拔极限承载力与承载力特征值的比值规律,从而更好的指导设计及施工。试验表明,钢管桩拔极限承载力介于其特征值的2.1倍～3.8倍,预应力管桩抗拔极限承载力介于其特征值的1.8倍～2.6倍,2倍的设计取值是合理的,且相对钢管桩来说偏保守。