重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证

目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证。方法测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞。以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人Ig G结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数。通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性。并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证。结果淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率最高,确定该细胞为靶细胞。CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4%~111.9%之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10%以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93%~114.42%之间,RSD值在10%以内,3 d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20%以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50%~150%范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.045 2 x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定。结论该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测。     

抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方的初步筛选

目的初步筛选抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方组成。方法以PBS为缓冲体系,聚山梨酯-80(Tween-80)为表面活性剂,乙二胺四乙酸(EDTA)为抗氧化剂及溶液不同pH值为关键因素,实验设计(Design of Experiment,DOE)10组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,分别进行加速稳定性试验[40℃保存0、1、7及14 d],分析单克隆抗体主要质量属性[分子排阻-高效液相色谱(size-exclusive-high performance chromatography,SEC-HPLC)和毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)分析纯度,毛细管等点聚焦(capillary isoelectric focusing,cIEF)分析电荷变异体,动物实验检测抗体效价)]变化,初步确定制剂最适配方。结果单克隆抗体制剂经SEC-HPLC分析,1、2、9及10制剂配方组纯度较好,经CE-SDS分析,1、2、7～10制剂配方组纯度较好;经cIEF分析电荷变异体,2及9制剂配方组保护效果较好;经动...     

波流联合作用下海上输油漂浮软管动力响应分析

海上输油漂浮软管是浮筒和油轮的连接通道,其在波流联合作用下的动力响应直接影响漂浮软管管组的安全.以某海域现役漂浮软管管组为研究对象,利用OrcaFlex软件建立由首管、主管和尾管组成的漂浮软管管组有限元模型,同时考虑法兰力学特性,分析不同波浪及海流参数下管组上各点的最大轴向拉力、最大弯矩和最大曲率值的变化规律,研究各参...     

基于注意力关系网络的无线胶囊内镜图像分类方法

无线胶囊内镜（WCE）技术可以检测出肠胃道异常,计算机辅助诊断WCE图像方法由于标注图像数据量少、图像类内变异度高和类间相似等原因导致效果不佳。为此,提出一种基于注意力关系网络的WCE图像多分类方法。将关系网络、注意力机制以及元学习训练策略相结合,构造基于注意力机制的嵌入模块以提取WCE图像特征,将提取后的特征进行特征映射级联后输入到关系模块,根据关系模块输出的相似性评分判断样本所属类别,采用元学习训练策略训练网络。实验结果表明,该方法的分类精度高于RelationNet、MAML等小样本分类方法,且在WCE数据集上该方法的精度高达90.28%。     

融媒时代播音员主持人的职业素养

在融媒体的时代背景下,各种新媒体飞速发展,呈现出抢占传统媒体主导地位的新趋势.融媒体时代里的新媒体给传统媒体的发展造成了一定程度的冲击,传统媒体的传播力、影响力有所下降,播音员主持人在这种情况下也面临着巨大的挑战.在融媒体时代下,对播音员主持人的要求也变得更高,在新闻内容的选择上、播音形式的多元化,以及自身综合实力的提...     

基于分子筛的天然气脱水装置的现状及展望

为了说明分子筛脱水技术的重要性并且更系统、更全面地研究分子筛脱水技术及其相关天然气脱水装置,对基于分子筛的天然气脱水技术及装置发展现状进行了分析和总结.在分析了分子筛技术对天然气脱水机理和性质的基础上,介绍了分子筛脱水工艺和成型技术的国内外发展现状,论述了国内外典型基于分子筛的天然气脱水装置的结构及工作原理,比较了脱水效果、使用寿命、稳定性和自动化程度等主要性能,并对分子筛脱水装置的发展趋势进行了总结和展望.     

抗破伤风毒素单克隆抗体细胞培养基的筛选与优化

目的 对抗破伤风毒素单克隆抗体细胞培养基进行筛选与优化.方法 首先通过评估多种商业无血清培养基中抗破伤风毒素单克隆抗体工程细胞株CHO-K1-G2的生长及代谢参数,筛选出一种进行组分优化的基础培养基;再利用试验设计(Design of Experiments,DOE)的方法从23种培养基添加物中筛选出能够显著促进细胞蛋...     

不同通气方式对抗破伤风毒素抗体工程细胞株生长及蛋白表达的影响

目的探讨生物反应器不同通气方式对抗破伤风毒素抗体的CHO工程细胞株生长、代谢及目的蛋白表达的影响。方法在3个3 L生物反应器中,分别选用微泡、大泡和膜供氧的通气方式,以相同的初始密度接种CHO种子细胞,设置相同的温度、pH、搅拌速度、溶氧(dissolved oxygen,DO)等关键培养参数,采用补料分批培养模式进行培养。每日取样,分别检测培养液的活细胞密度(viable cell density,VCD)、细胞活率、渗透压及葡萄糖、乳酸、NH₄⁺和抗体蛋白浓度。筛选细胞生长较好及乳酸等代谢副产物累积较少且蛋白表达量高的一种通气方式。结果微泡通气方式下,CHO细胞生长缓慢,最高VCD为7.63×10⁶个/mL,接种后细胞活率一直低于90%且下降较快,培养8 d,抗体蛋白浓度为76 mg/L。大泡通气方式下,最高VCD为12.45×10⁶个/mL,培养1～6 d细胞活率均高于90%,培养第8天乳酸浓度开始下降,培养10 d,抗体蛋白浓度为534 mg/L。膜供氧通气方式下,最高VCD为13.54×1...