优化简并引物PCR克隆Candida glycerinogenes 3-磷酸甘油脱氢酶基因片段

为了从工业生产菌株耐高渗产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)克隆甘油合成的限速酶编码基因胞浆NAD -3-磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD),对不同酵母和其他真核生物的NAD -3-磷酸甘油脱氢酶进行比对,分析氨基酸和核苷酸的保守序列,设计了4对简并引物用于扩增C.glycerinogenes的NAD -3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)基因片段,经过优化PCR反应条件,利用其中一对中等简并度的引物扩增出CgGPI)基因中约600 bp的保守核心片段.DNA序列及推绎的氨基酸序列进行比对分析表明,该基因片段与其他酵母的胞浆NAD -3-磷酸甘油脱氢酶基因的对应区域具有典型的保守区域,并且与安格斯毕赤酵母的GPI)基因相似性较高.     

粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的发酵条件研究

研究了影响粗糙脉孢菌突变菌株合成漆酶的一些摇瓶发酵条件，包括通气量、培养温度、甲醇浓度、Cu2＋浓度等。结果表明，在500mL三角瓶中装入含150μmol／L Cu^2＋浓度的发酵培养基BMMY 50mL，接种后于30℃，200r／min培养7d，用0．5％甲醇诱导，在第5天时漆酶酶活最高可达3．88u／mL。     

麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

采用重叠PCR方法在麦芽糖α-淀粉酶编码基因5’端添加地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因信号肽编码区,获得重组基因BlMa。重组基因与芽孢杆菌表达载体pHY-P43连接后直接转化枯草芽孢杆菌,获得重组质粒pHY-P43-BlMa。枯草芽孢杆菌淀粉酶基因缺陷株1A717被用作BlMa基因表达宿主菌,重组菌命名为Bacillus subtilis/pHY-P43-BlMa。酶活检测和SDS-PAGE电泳均显示,B.subtilis/pHY-P43-BlMa表达的重组麦芽糖淀粉酶(BlMa)全部分泌到培养液中。HPLC检测表明,BlMa催化可溶性淀粉水解产物主要为麦芽糖。对B.subtilis/pHY-P43-BlMa摇瓶发酵条件进行优化。获得优化发酵培养基配方:10%玉米淀粉,2.5%药媒,0.3%(NH4)2SO4,0.03%CaCl2,0.1%NaH2PO4,在优化条件下重组菌发酵酶活为5.9 U/mL。     

产甘油假丝酵母甘油合成关键酶基因CgGPD1多拷贝表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

采用PCR的方法从产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes) 中扩增出3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因及侧翼序列 CgGPD1,分别构建了含不同 CgGPD1 拷贝数的根癌农杆菌双元载体pCAM3300-zeocin-CgGPD1(Ⅰ)、pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1(Ⅱ)和pCAM3300-zeocin-CgGPD1 -CgGPD1-CgGPD1(Ⅲ).在大肠杆菌JM109中,研究了其在不同质量浓度NaCl、葡萄糖胁迫下表达情况.结果表明,在大肠杆菌中GPDH的活性随着NaCl、葡萄糖质量浓度的升高而增加.当NaCl质量浓度达到2.5 g/dL时,GPDH的酶活比在0.5 g/dL NaCl下平均提高31.2%; 当葡萄糖质量浓度提高至10 g/dL时,GPDH的酶活比2 g/dL葡萄糖下平均提高31.8%;在相同的NaCl、葡萄糖质量浓度下,GPDH的活性随着 CgGPD1 拷贝数的增加而升高,JM109(Ⅱ)比JM109(Ⅰ)的GPDH酶活平均提高8.2%,JM109(Ⅲ)比JM109(Ⅱ)的GPDH酶活平均提高9.9%.以上结果表明,在大肠杆菌中 CgGPD1 基因的表达同样受渗透压胁迫调节.     

产还原型谷胱甘肽酵母菌的筛选与初步鉴定

从自然界筛选出98株产还原型谷胱甘肽(GSH)的酵母菌,发酵30h,分别测定胞内GSH含量,其中2053#菌株的GSH产量最高。初步发酵实验结果表明,2053#酵母菌株在发酵28h时菌体生物量(细胞干重)达到最大值11.55g/L,而胞内GSH含量在发酵30h时达到最大值49.74mg/L。在常规生理生化方法鉴定的基础上,结合18SrDNA序列分析表明2053#与Candidaparapsilosis(近平滑假丝酵母)的相似性达99.75%,为Candidaparapsilosis的1个亚种。     

拟无枝酸菌ST2710转化洛伐他汀为无锡他汀的发酵工艺的初步研究

无锡他汀是胆固醇合成途径中限速酶羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,由洛伐他汀经拟无枝酸菌(Amycolatopsis sp.ST 2710)转化产生。文中在摇瓶水平考察了底物浓度、溶氧和剪切力等因素对洛伐他汀(底物)转化为无锡他汀(产物)的影响,并在5 L发酵罐上进行了分批发酵及材料分批发酵研究。摇瓶结果表明,菌株对溶氧要求较高,对剪切力很敏感,底物适宜添加浓度为1 g/L。在5 L发酵罐间歇发酵过程中。在控制溶氧不低于35%.搅拌转速为300r/min,产物产量达到最高,为0.77 g/L左右,发酵周期为80 h,较摇瓶发酵缩短16 h。采用补料发酵工艺后,有效减缓底物抑制,产物产量达到1.83 g/L。是分批发酵的2.4倍。     

密度敏感鲁棒模糊核主成分分析算法

针对传统核主成分分析算法(Kernel principal component analysis, KPCA)对野性样本点敏感等缺陷, 提出一种密度敏感鲁棒模糊核主成分分析算法(Density-Sensitive robust fuzzy kernel principal component analysis, DRF-KPCA).该算法首先通过引入相对密度确定样本初始隶属度, 并构建出基于重构误差的隶属度确定方法, 同时采用最优梯度下降法实现隶属度的更新, 有效解决了传统核主成分分析算法对野性样本点敏感导致的主成分偏移等问题.最后, 通过简化重构误差的计算公式, 大大降低了算法的计算复杂度和运行时间.实验部分, 利用有野性样本点和无野性样本点的数据集对本文算法、KPCA及其他改进算法的主成分分析性能进行测试, 结果表明DRF-KPCA能有效消除野性样本点对主元分布的影响.此外, 试验通过分析参数对算法性能的影响给出了合理的参数取值建议.最后将本文算法与其他算法应用到分类问题中进行对比, 实验表明本文算法的分类性能较其他算法有显著提高.     

建筑师的明鉴与指引——读《佘畯南选集》有感之三

<正>佘总的集子,在我看来,不能是只拿来读的,是应该来品味,来感悟的。有幸见过佘总几次,可惜没机会接受他的指导。珍藏的一本《佘畯南选集》还有佘总的亲笔签名。那是1997年,听说佘总的集子印好,佘总来院里签名售书,兴冲冲跑过去,见到一位慈目华发的老者,已说不出话,陪在一边的夫人亲切地问过我姓名,佘总在集子的扉页上写下了一句问候,然后签上自己的名字,写得     

基于对角块分解的下行方向快速预编码算法

利用同一电缆包中布线的空间特殊性,提出一种抑制下行传输方向串音的预编码算法.一方面由于算法中仅涉及二阶矩阵的逆,运算量很小,易于实现.另一方面,此方法性能优于之前提出的一阶逼近算法,而与三对角线逼近算法性能相近,但运算量要小得多.基于实测数据的计算机仿真验证了结果的正确性.     

产甘油假丝酵母两种转化方法的比较

为了研究产甘油假丝酵母高产甘油和耐高渗的机制,以Zeocin作为选择标记,考察和比较了两种转化方法,即醋酸锂法和电转化法的转化效果,以建立简单有效的产甘油假丝酵母转化体系。结果表明,细胞生长时期是影响转化率的关键因素。在OD600约为1.3时制备感受态细胞,在电压为1.5 kV时进行电击,可获得较高转化率,为每微克DNA 139个转化子。在OD600约为1.0时制备感受态细胞,醋酸锂预处理细胞1 h,获得的转化率为每微克DNA 154个转化子。综合考虑,醋酸锂法更适合于产甘油假丝酵母的转化。