降解玉米赤霉烯酮菌株的筛选、降解机制及特性研究

玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是一种易于污染谷物和饲料的雌激素类真菌毒素,严重危害人类和动物健康。采集霉变饲料、土壤等样品,以ZEN为唯一碳源的培养基进行初筛,采用ELISA法筛选对ZEN的降解能力较强的菌株。采用形态学和分子生物学方法对菌株进行鉴定。对菌株的菌体、上清液、细胞内容物分别进行降解实验,探讨其降解机制。研究不同温度、pH、接种量和时间对菌株降解效率的影响。接种到污染ZEN（1 μg/mL）的原料,评价筛选菌株对原料中ZEN的降解效率。通过小白鼠攻毒试验评价菌株的安全性。结果表明从96个分离菌株中筛选出1株ZEN降解能力较强的菌株G-6,最高达到81.19％。菌株为G+,呈杆状,中等大小,能够形成芽孢。16S rDNA序列分析表明G-6和解淀粉芽孢杆菌的亲缘关系最近。不同成分降解试验表明该菌株主要是通过细胞分泌的胞外酶降解ZEN。菌株G-6最佳降解ZEN的条件为：温度37 ℃,pH5.0,接种量3％,培养时间72 h。样品毒素降解实验证明菌株均能100％降解可溶性淀粉、玉米粉、豆粕粉中的ZEN。小白鼠试验结果表明该菌株不具致病性,是一种安全菌株。获得了1株高效降解ZEN的解淀粉芽孢杆菌,为ZEN污染食品和饲料的生物脱毒提供了可能。     

以金属有机框架材料为基质免疫磁珠的制备及在玉米样品检测中应用

采用反相微乳液法,依据金属-有机框架材料一磷酸腺苷(adenosine monophosphate, AMP)氯化锌水凝胶可以固定蛋白的原理,通过在纳米四氧化三铁磁珠表面包覆AMPZnCl_2水凝胶并偶联抗体,制备了一种新型的水凝胶免疫磁珠。选取了玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEA)单抗来制备水凝胶免疫磁珠-Fe_3O_4@AMPZnCl_2·ZEA单抗磁珠,对c样品玉米粉进行了ZEA添加回收率测定,添加回收率在84. 81%～90.00%之间,相对标准偏差为4.86%～9.44%;比较了Fe_3O_4@AMPZnCl_2·ZEA单抗磁珠与DZTMSPREP免疫亲和柱对6种玉米粉中ZEA的纯化效果,测定结果和使用免疫亲和柱检测结果保持一致,说明该材料可应用于实际样品的纯化。     

基于高效液相色谱-三重四极杆质谱分析番石榴叶多酚组分提取方法的研究

目的优化番石榴叶多酚组分的回流提取条件,为其工业化生产提供参考。方法建立番石榴叶9种已知多酚的高效液相色谱-三重四极杆质谱分析方法,在此基础上,以已知多酚提取率为考察指标,对料液比、提取液中乙醇体积分数、提取温度、提取时间和筛网目数进行单因素试验,然后,在单因素试验的基础上,选择对多酚提取率影响较大的4个因素(料液比、乙醇体积分数、提取温度和提取时间)设计四因素四水平正交试验,确定最优提取工艺条件。结果番石榴叶多酚最优提取条件为:料液比1:25 g/mL,乙醇体积分数60%,提取温度70℃,提取时间3 h。最优提取条件下提取率为2.352 mg/g。结论建立的番石榴叶多酚组分液质分析方法有效、可靠,优化得到的提取方法提取率高、重复性好。     

一株降解呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的筛选与鉴定

目的:分离筛选能够降解呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)的芽孢杆菌,以用于该毒素的生物降解。方法:采集霉变秸秆、土壤和粪便样品,先将样品加热80℃后,取上清液接种到以DON为唯一碳源的分离培养基富集DON降解菌。以LB培养基分离纯化富集菌,然后对分离到的菌株进行DON毒素降解能力检测。对降解能力最强的菌株进行形态学观察、生理生化实验和16S r DNA序列鉴定。结果:从16株分离菌中筛选得到一株对DON降解能力最强的菌株B.JG05,降解率最高可达80.61%,且对含DON饲料的降解率为82.68%。该菌株呈短杆状,能形成芽孢;生理生化特性符合蜡样芽孢杆菌的基本特征;16S r DNA序列进化树分析表明该菌株与蜡样芽孢杆菌的亲缘关系最近。结论:筛选获得了一株高效降解DON的蜡样芽孢杆菌B.JG05,为饲料和食品中DON毒素的生物降解提供了可能。     

大孔树脂对酸枣仁中活性物质的吸附性能研究

采用正交实验对回流法提取酸枣仁皂苷和黄酮的条件进行了优化,然后从7种不同的大孔吸附树脂中筛选出一种吸附和解吸性能良好的树脂--三菱SP700树脂,又研究了SP700对酸枣仁中皂苷和黄酮2类活性物质的吸附动力学、吸附等温线以及解吸动力学.皂苷和黄酮提取的最佳条件分别是:ψ(乙醇)=90%、v(乙醇溶液,mL)∶m(酸枣仁,g)=20∶1、45℃、6.5 h;ψ(乙醇)=70%、v(乙醇溶液,mL)∶m(酸枣仁,g)=15∶1、30℃、3.5 h;SP700对皂苷和黄酮的吸附容量分别可达128.5 mg/s和114.0 mg/g;皂苷和黄酮在SP700上的吸附在常温下进行2 h即可达到平衡;皂苷和黄酮在SP700 上的吸附最适合的浓度范围分别足8～10 mg/mL和3～5 mg/mL;经过拟合发现,Langmuirr模型较Freundlich模型更适合描述2种物质在SP700上的吸附过程,因此2种物质的吸附过程是以单分子层吸附为主;70%的丙酮可以将2种物质从SP700全部解吸下来;同样地,皂苷和黄酮在树脂上的解吸选择在室温下进行,2 h即可达到完伞解吸.     

液质联用法检测饼干中4种单端孢霉烯类 真菌毒素

目的建立饼干中4种单端孢霉烯类真菌毒素的液相色谱-质谱联用分析方法。方法样品经乙腈/水溶液(84:1 6,V:V)提取后用MycoSep227或MycoSep226多功能柱净化,Agilent ZORBAX Bonus-RP色谱柱分离,液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)测定,电喷雾正离子模式(ESI~+)和负离子模式(ESI~-)多反应模式检测。结果样品中4种单端孢霉烯类真菌毒素在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数均不低于0.997,定量限为5~20μg/kg,3个加标水平下平均回收率为66.9%~1 01.8%,相对标准偏差为3.7%~13.9%。结论该方法具有前处理简单、净化效果好、灵敏度高,适用于同时检测一种样品中4种单端孢霉烯类真菌毒素的残留量。