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目的克隆并表达黄杆菌肝素酶I(HepI)基因。方法通过PCR从黄杆菌基因组DNA中扩增黄杆菌HepI基因,验证后插入到表达质粒pET-22b中构建表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白质表达,并用Azure A法测定酶活性。结果PCR扩增得到序列正确的HepI基因,并将该基因成功插入到pET-22b表达载体中。重组质粒转入E.coli BL21(DE3)后表达的蛋白质经SDS-PAGE分析,与目的蛋白质的相对分子质量基本一致,其活性约为50 U/LA600。结论克隆并成功表达了黄杆菌HepI基因。 相似文献
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目的研制一种依诺肝素钠宽分布相对分子质量(Mr)对照品。方法以肝素钠为起始原料,经过成盐、酯化、β-消除降解等步骤制备依诺肝素钠宽分布Mr对照品;以欧洲药典低分子肝素(LMWH)Mr对照品为对照,利用高效分子排阻色谱法(HPSEC)测定自制依诺肝素钠宽分布Mr对照品的Mr及其分布,并与EP对照品比较。分别用自制对照品与EP对照品检测依诺肝素钠原料药的Mr及其分布,并比较检测结果。结果自制对照品与EP对照品的UV图谱与RI图谱相近,Mr及其分布接近,两种对照品测得依诺肝素钠Mr及其分布接近。结论以β-消除降解法制备的依诺肝素钠宽分布Mr对照品可准确测定依诺肝素钠的Mr及其分布,为不同LMWH按各自生产工艺制备其Mr对照品提供参考。 相似文献
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通过笔者在上汽通用五菱汽车股份有限东部车身车间品质管理改进实践,阐述一种新的分解方式在车问的应用,对比新旧分解模式,突出新的分解模式在品质管理改进中的巨大优势,实践表明,新的分解方式能极大的调动车间生产工段的积极性,非常适合有较多工序的生产车问的应用. 相似文献
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目的 建立那屈肝素钙中N-NO含量测定方法.方法 采用热能分析仪(TEA)进行分析.运行参数:氮气压力5 psi,氮气流量35 mL/min,冷却液温度0~5℃,液滴回流速率1~2 s/滴,氧气压力2 psi,灵敏度235,进样量50 μL.结果 N-NO含量以N-亚硝基二正丙胺(NDPA)含量计,NDPA浓度在0.03~0.15 μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.9991;精密度试验(n=6)的相对标准偏差(RSD)为2.27%;定量限(信噪比10:1)和检测限(信噪比3:1)分别为0.03和0.005 μg/mL:此法的平均加样回收率为99.75%,RSD为0.93%.结论 本实验得到的方法精密度好,准确度高,适合那屈肝素钙中N-NO的含量测定. 相似文献
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目的 克隆并表达黄杆菌肝素酶I(HepI)基因.方法 通过PCR从黄杆菌基因组DNA中扩增黄杆菌HepI基因,验证后插入到表达质粒Pet-22b中构建表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白质表达,并用Azure A法测定酶活性.结果 PCR扩增得到序列正确的HepI基因,并将该基因成功插入到Pet-22b表达载体中.重组质粒转入E.coli BL21(DE3)后表达的蛋白质经SDS.PAGE分析,与目的蛋白质的相对分子质量基本一致,其活性约为50 U/LA600.结论 克隆并成功表达了黄杆菌HepI基因. 相似文献