中国株HIV-1融合基因gag-gp120在大肠杆菌中的表达

<正>艾滋病是目前人类最难控制、耗资最大的一类病毒性疾病,引起艾滋病的主要病原为HIV-1。GaP蛋白是HIV-1的主要结构蛋白之一,它在病毒的复制、成熟、感染和形态维持等方面均起着重要的作用,并能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。由于它在不同毒株间相对保守,因此,其诱导的抗体水平在临床上成为HIV感染的主要检测指标。Gp120蛋白是由HIV-1Env蛋白经剪切而形成的,在gp120上的C2区及其羧基末端等都与中和抗体的产生有关,因此,它已作为首选的HIV-1亚单位疫苗和重要的诊断试剂。在大肠杆菌中表达外源基因具有操作简便,成本低廉等优点。尽管有些表达的产物不能被忠实地翻译后加工,但可作为检测和诊断方面的研究。     

HIV-2 Gp105基因重组鸡痘病毒的构建及鉴定

目的　研制预防HIV -2的重组鸡痘病毒活载体疫苗。方法　将HIV -2Gp10 5基因插入鸡痘病毒转移载体pUTA2复合启动子的下游 ,构建鸡痘病毒转移载体pUTA2 Gp10 5。将该重组质粒与鸡痘病毒 (FPV) 2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,进行同源重组。通过 3次BrdU加压筛选 ,以PCR、RT PCR、IFA和Westernblot鉴定重组病毒。结果　从重组鸡痘病毒的基因组和总RNA中能扩增出大小为 6 5 3bp的目的基因 ;感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应 ;表达产物与人HIV- 2血清发生阳性反应 ,目的蛋白相对分子质量约为10 5 0 0 0。结论　成功获得 1株重组鸡痘病毒 ,可正确表达HIV 2Gp10 5基因。     

含炭量对增强PP/BC复合材料的导电性能影响

以竹炭（BC）为填料,聚丙烯（PP）树脂为基体,采用熔融共混法制备了PP/BC复合材料,通过扫描电子显微镜、吸水率、显气孔率、力学性能和热稳定性进行综合分析,研究了BC含量对其导电性能的影响。结果表明,BC的引入可以显著降低PP/BC复合材料的体积电阻率,当BC含量大于30 %（质量分数,下同）时,增长效果尤为明显。     

小鼠对HIV-2嵌合结构基因重组鸡痘病毒的免疫反应

将HIV-2嵌合结构基因gag-gp105插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒pA-gg;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法鉴定重组病毒;将获得的重组病毒大量制备并纯化后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清HIV-2抗体,流式细胞仪测定CD4 、CD8 T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性.结果表明,成功筛选出一株可稳定表达HIV-2嵌合蛋白Gag-gp105的重组鸡痘病毒rFPV-gg;该重组病毒免疫组小鼠的血清出现HIV-2抗体,脾T细胞亚类数量增加,并产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性.本研究提示,HIV-2 gag-gp105重组病毒能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答.     

表达HIV-1结构蛋白靶细胞的制备及鉴定

Ｉ型人免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ 1)疫苗的研究是当前控制艾滋病广泛流行的主要任务。大量的临床研究表明 ,除了中和抗体外 ,细胞毒性Ｔ淋巴细胞 (ＣＴＬ)杀伤活性是防止ＨＩＶ 1感染的一个重要的保护性免疫参数 ,也是衡量疫苗免疫效果的一个极其重要的指标。本研究利用能够将表达蛋白递呈到细胞表面的真核表达载体ｐＤｉｓｐｌａｙ ,构建了共表达ＨＩＶ 1核心蛋白ｇａｇ和外膜蛋白ｇｐ12 0的靶细胞 ,并进行了鉴定。将含有ＨＩＶ 1ｇａｇ ｇｐ12 0嵌合基因的质粒ｐＫＳＧＰ用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ双酶切后 ,与用ＢｇｌⅡ和ＸｈｏＩ…     

HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达

目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。