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目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 k D,GRP78)shRNA真核表达质粒,并建立其稳定转染A549细胞系。方法根据Gen Bank中登录的人GRP78基因序列(3309)设计3对互补寡聚单链DNA干扰序列(GRP78-mi R-1、GRP78-mi R-2、GRP78-mi R-3)及1对阴性对照,分别插入至载体pc DNA6.2TM-GW/Em GFP,构建shRNA真核表达质粒。在Lipofectamine 3000介导下将各shRNA真核表达质粒分别转染A549细胞,并经Blasticidin S HCl加压筛选稳定的转染细胞系。实时荧光定量PCR和Western blot法检测A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平。结果各shRNA真核表达质粒经测序鉴定证明均构建正确。稳定转染shRNA真核表达质粒的A549细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与空白对照组比较,A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平明显降低(P0.05),阴性对照组无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了人GRP78的shRNA真核表达质粒,并建立了其稳定转染的A549细胞模型,为进一步研究GRP78在肺癌细胞的侵袭和转移中的作用机制奠定了基础。 相似文献
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高层建筑混凝土地下室墙裂缝的现象普遍存在,这严重降低了建筑的耐久性,给今后处理补救也造成极大困难,本文就地下室混凝土地下室墙裂缝渗漏问题主要从技术层面分析其成因,并阐述设计和施工过程中的技术措施。 相似文献
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在HFC网络中,一个光节点站(或光接收机)往往要向多座住宅楼提供射频信号。光节点站的电源供给一般都采用就近取电的方式,一旦为光节点站供电的这栋楼房因故停电,就会造成该光节点站所带的全部用户都没有信号。没停电楼房的用户会以为这是网络又出故障了。这类问题在整个网络用户意见投诉中占有不少的比重。 相似文献
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针对冲天炉污染生产和生活环境的状况,采用了切实可行的消烟除尘、噪声治理以及确保环保设备正常有效运行的辅助措施。使炉前烟尘浓度达到237.21mg/Nm~3、居民区烟尘浓度在200mg/Nm~3以下,达到了环保标准中规定的250mg/Nm~3限制水准。 相似文献
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同频同播系统中同频干扰及其抑制对策 总被引:2,自引:1,他引:1
介绍了无线同频同播系统的原理,通过分析得出同频干扰产生的原因是由于载波频率和调制特性的差异所致.从发射机安装、载频精度、频率偏移、音频参数优化等方面提出了抑制同频干扰的对策,并在MATLAB中进行了仿真验证,对研制、完善和应用无线同频同播系统具有较高的实用价值. 相似文献