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A liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometric (LC/MS/MS) method is described for analysis and confirmation of ochratoxin A in pig kidney and rye flour using derivatization of ochratoxin A to the methyl ester. Ochratoxin A methyl(d3)ester is used as internal standard. The method works well, the detection limit is 0.02 μ g/kg and the repeatability (coefficient of variation) is between 6% and 16% in the contamination range 0.5 to 8 μ g/kg. 相似文献
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WK Vogel GL Peterson DJ Broderick VA Mosser MI Schimerlik 《Canadian Metallurgical Quarterly》1999,361(2):283-294
Double mutant cycles provide a method for analyzing the effects of a mutation at a defined position in the protein structure on the properties of an amino acid at a second site. This approach was used to map potential interactions between aspartates 69, 97, and 103 in the m2 muscarinic acetylcholine receptor transmembrane helices 2 and 3. Receptors containing single and double aspartate to asparagine mutants were expressed in Chinese hamster ovary cells and their effects on ligand binding, signal transduction, and thermal stability determined. Analysis of the double mutant cycles showed that the mutations had approximately additive effects on ligand binding, signal transduction, and thermal stability. Ligand binding and thermal inactivation results support the conclusion that aspartate-103 is the ligand amine counterion. Effector coupling properties of the mutant receptors showed that aspartate-103 was also required for signal transduction activity. The mutation of aspartate-69 to asparagine completely eliminated signal transduction by the agonists acetylcholine, carbachol, and pilocarpine but not oxotremorine M, which caused reduced but significant inhibition of adenylyl cyclase and stimulation of phospholipase C. In contrast, adenylyl cyclase stimulation by the asparagine-69 mutant was elicited only by acetylcholine and carbachol but not by oxotremorine M. The variation in agonist-dependent effector coupling properties provides evidence that the asparagine-69 mutant can exist in activated receptor states that are different from the wild-type m2 muscarinic receptor. 相似文献
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