2’-岩藻糖基乳糖的微生物合成研究进展

2’-岩藻糖基乳糖（2’-fucosyllactose,2’-FL）是母乳寡糖中含量最高的寡糖（约占31%）,在婴幼儿的生长发育中起重要作用。2019年底,2’-FL已经在欧盟获批作为新型食品投入市场,因此,如何高效、安全地生产2’-FL成为当下的研究热点。与其他方法相比,利用微生物细胞工厂进行2’-FL的合成具有成本低、安全、快捷等特点,是实现大规模生产2’-FL的可行方法。本文主要针对微生物合成2’-FL过程中关键酶的活性、产物的分泌和积累、底物和中间代谢产物的分解代谢以及辅因子再生等方面进行综述,并对未来的发展趋势进行展望。     

纳豆咀嚼片中微量元素铁、锌、铜、锰的分析

采用湿法消化样品,确定了检测纳豆咀嚼片微量元素的最佳处理条件。试验证明,混酸HNO3：HClO4的比例为4：1,消化温度为140℃,消化时间80min时样品可以得到充分分解。采用了ICP-AES法测定纳豆咀嚼片中微量元素铁、锌、铜、锰的含量,测定结果比较准确。     

枯草杆菌蛋白酶水解对大豆蛋白肽谱变化规律的影响

该研究针对芽孢菌来源的枯草杆菌蛋白酶对大豆蛋白的水解过程,探究过程中形成肽谱的变化规律。使用高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱检测不同时间点的水解多肽,基于非特异性酶切肽谱鉴定方法,解析多肽序列和组成,展示肽谱的动态变化特征和氨基酸位点种类选择的倾向性。结果发现,枯草杆菌蛋白酶更倾向于酶切大豆蛋白中组氨酸C 端、天冬酰胺C 端、丙氨酸N 端和苏氨酸N 端的肽键。     

纳米二氧化钛对小鼠亚慢性暴露的肠道微生物组和代谢组关联分析

基于微生物组学和代谢组学技术探讨纳米二氧化钛(TiO₂)颗粒对C57BL/6小鼠肠道微生物和粪便代谢物的影响及组学间的关联性。设置对照组和实验组,对照组灌胃磷酸盐缓冲液,实验组以100 mg/(kg m_b·d)纳米TiO₂灌胃,连续暴露13周。测定血糖、血脂等指标,并利用16S rDNA测序和气相色谱-质谱技术对肠道内容物进行分析,筛选出显著变化的微生物和差异代谢物。结果表明,与对照组相比,实验组小鼠空腹血糖水平显著上升(P=0.032)。厚壁菌门(Firmicutes)、样棒菌属(Allobaculum)、乳杆菌属(Lactobacillus)、颤螺旋菌属(Oscillospira)相对丰度增加。差异代谢物与甘油酯类代谢、半乳糖代谢、色氨酸代谢通路有关。厚壁菌门细菌相对丰度与差异代谢物水平呈负相关,其他门类的细菌相对丰度与差异代谢物水平呈正相关。推断小鼠在纳米TiO₂亚慢性暴露后,所产生的毒性作用可能与粪便中糖脂代谢异常相关。     

里氏木霉306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)5L罐分批发酵条件的研究

以摇瓶分批发酵条件为基础，对基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)306进行了5L发酵罐分批发酵条件的研究。确定了适宜的发酵条件：温度为28℃，溶氧浓度控制30％饱和度，pH值在自然状态下进行发酵。以5L发酵罐分批发酵试验数据为依据，对里氏木霉306生物合成t-PA分批发酵动力学进行了研究。应用MATLAB工具软件进行非线性规划，建立了菌体生长、底物消耗和产物合成的发酵动力学模型。     

3-甾酮-△1-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶,能催化3-甾酮化合物在C1,2位处脱氢,提高原有底物的生物活性.利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-△1-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,并用分光光度法检测酶的活力.结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍.     

耐酸性高温α-淀粉酶突变基因的异源表达及纯化

将去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a上,实现重组质粒pET-amyd在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.经硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析,重组酶AMYD的比活达到354.6 U·mg-1、纯化倍数为83.83,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,AMYD酶分子量为63.5 kDa.重组酶AMYD的最适温度80℃、最适反应pH值为4.5,在温度低于90℃、反应pH值4.0～6.5的条件下,酶活较稳定.     

耐促溶剂雷斯青霉菌株N~+注入诱变选育

在甾体生物催化过程中,向发酵液中添加亲水性有机溶剂,是增加底物溶解进而提高转化效率的有效手段,但有机溶剂对于菌体普遍具有毒性。为此采用N+注入诱变方法,对出发菌株雷斯青霉p-10-8进行改良,获得耐促溶剂菌株60 A-5-8,当投料量增大到4‰时转化率达82.61%。经过5次传代实验证明,该菌株具有较高的遗传稳定性。     

清代醋缸酿造陈醋的香味物质的比较研究

采用顶空固相微萃取气质联用的分析方法,对清朝醋缸所酿陈醋和现代醋缸所酿陈醋的香气成分进行了分析和比较,共检测到65种挥发性化合物,其中醇类3种、酚类6种、醛类7种、酸类2种、烃类15种、酮类3种、酯类18种、含氮含硫杂环类化合物9种、呋喃类2种,并通过主成分分析方法对清代和现代醋缸所酿陈醋在香味物质组成上进行了比较,结果表明,清代醋缸与现代醋缸所酿陈醋在香味组成上存在显著差异,反映了从清代延续下来的醋缸,在漫长的陈酿历史中,形成了独特的香味.     

高活力液体碱性蛋白酶制备工艺研究

为了获得高质量浓缩液体蛋白酶,对提取工艺中不同絮凝剂,不同大小活性炭以及膜过滤条件进行了优化.结果表明0.1%质量分数NaAlO2絮凝剂在pH=8.0时絮凝速度快、效果好;1%中型颗粒活性炭脱色效果明显;聚丙烯膜超滤温度10℃、压力0.05 MPa时酶的回收率最高.优化后的工艺使液体酶活力提高到3.2×105 μ/mL,使初始发酵液浓缩了8.3倍,酶回收率达到83.6%.