脯氨酰内肽酶水解啤酒蛋白的研究

将脯氨酰内肽酶(PEP)添加在啤酒后酵液中,通过冷混浊实验分析脯氨酰内肽酶对啤酒非生物稳定性的影响。结果表明,添加5mg/L的脯氨酰内肽酶就能有效地提高啤酒的非生物稳定性;采用75%硫酸铵沉淀啤酒蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,啤酒蛋白电泳图谱的分布主要表现为8～14.4 ku的窄带和35～45 ku的宽带,而经脯氨酰内肽酶处理的啤酒蛋白电泳图谱中8～14.4 ku的条带消失,说明此蛋白被脯氨酰内肽酶水解。     

低聚木糖的模拟移动床色谱分离研究

研究了用模拟移动床色谱分离高含量低聚木糖的工艺。首先通过单柱固定床实验来选择适合低聚木糖分离的固定相,比较了不同类型的离子交换树脂对低聚木糖和单糖混合液的分离度和分离效率．筛选出DIAION—UBK530Na树脂为合适的分离介质;然后运用真实移动床模型,近似确立模拟移动床色谱分离工艺的初始操作参数．在理论分离原理的指导下,优化分离条件,在阀切换时间为300s、进料流量和洗脱流量分别为3．5mL／min和5ml/min、提取液和提余液流量分别为3．8mL／min和4．7mL／min、同时循环流量控制在8．9mL／min的条件下．使分离后的低聚木糖、单糖纯度均在90％以上,收率分别达到91．55％和92．18％。     

嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为 80目 ,麦芽糊精的最佳DE值为 3 0 %。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为 ( g/1 0 0mL) :棉籽饼粉 3 ,酵母浸粉 1 75 ,麦芽糊精 1 0 ,柠檬酸钠 0 3 ,CaCl2 0 3。K2 HPO4 1 ;最适摇瓶发酵条件为 :种龄 1 2h ,接种量 2 %,装液量 5 0mL/2 5 0mL ,摇床转速 2 0 0r/min ,3 4℃ ,发酵 5 4h ,碱性蛋白酶的发酵单位可达 3 3 985u/mL ,比优化前提高了5 4 48%。此外 ,还进行了 5L罐放大实验 ,在 5L罐所确定的最适工艺条件下 ,发酵单位可达3 65 79u/mL。     

酵母应激条件下产生抗氧化剂的研究

本文对酿酒酵母在低温和H2O2两种应激条件下产生的LYCD进行了研究,主要探讨了其中抗氧化物质的变化情况.结果表明：低温预处理能够显著增加细胞内谷胱甘肽（GSH）含量,提高SOD、CAT活性.低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性.低温和H2O2刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞具有抗氧化作用.     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34-5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9．6,该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌（Burkholderia）的同源性为99％摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g／L）;淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO4 1,聚乙烯醇大豆油乳化液20．其最高酶活为6．87U／mL。     

毕赤酵母表达蒜酶及其体外抗氧化功能研究

从大蒜鳞茎中克隆蒜酶基因,构建蒜酶真核表达载体,并在毕赤酵母系统中诱导表达,探讨重组蒜酶的活性及其催化蒜氨酸分解产生蒜素的抗氧化活性。利用RT-PCR方法克隆大蒜鳞茎蒜酶基因,通过p PIC9K载体构建p PIC9K-alliinase真核表达质粒,电转化法导入毕赤酵母GS115,筛选阳性克隆,经甲醇诱导后取发酵上清液进行SDSPAGE分析。利用丙酮酸法检测重组蒜酶的活性。并采用DPPH·法,分别研究有氧及无氧条件下蒜酶催化蒜氨酸分解产生蒜素的抗氧化活性。从大蒜中克隆出蒜酶基因,重组酶存在于毕赤酵母表达上清液中,形成糖蛋白,酶的比活力为(115.81±1.93)U/mg;无氧条件下蒜酶催化蒜氨酸分解产生蒜素的抗氧化能力高于有氧条件。克隆了蒜酶编码基因,并成功实现在毕赤酵母中的有效表达。无氧条件下蒜酶催化蒜氨酸分解产生蒜素抗氧化能力比有氧条件下高,为体内利用蒜酶和蒜氨酸制备高抗氧化能力的制剂提供基础。     

黄素单加氧酶及其在食品功能因子合成中的应用

黄素单加氧酶是一种重要的氧化还原酶,能够催化多种化合物的羟基化、拜尔-维利格氧化、硫氧化、环氧化和卤化反应等,被广泛应用于食品、医药和化工等领域。该文从分类、特性研究（包括表达条件优化和催化反应过程控制）、蛋白质工程及其在食品功能因子合成中的应用等方面对黄素单加氧酶进行综述,并对其发展前景进行展望。     

乳酸菌溶源性的检测及紫外诱变后溶源菌蛋白表达分析

用紫外诱变的方法对本实验室保藏的嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）和保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）进行溶源性的检测；并采用单向聚丙稀酰氨凝胶电泳，对不同诱变剂量下溶源菌菌体蛋白质组分的变化做了进一步分析，发现诱变前后菌体的蛋白组成发生了明显的变化，即随着诱变剂量的增加，菌体内蛋白种类，尤其是小分子蛋白有上升的趋势。     

枯草芽孢杆菌工程菌株产普鲁兰酶发酵条件的优化

利用基因工程手段获得的产长野芽孢杆菌普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌株WB600/pWB-pulB,通过单因素筛选及正交试验进行发酵培养基优化,得到产酶最佳配方为玉米淀粉3.0％,酵母膏20％,CaCl20.03％,Na2HPO41.0％.同时对重组菌株摇瓶条件下液体发酵的主要影响因素初始pH、接种量、装液量、转速、温度等进行探讨,确定了产酶最佳培养条件为,以3％接种量接种于优化后培养基,初始pH7.0,装液量30 mL/250 mL,37℃,200 r/min摇床培养36 h.在此优化条件下,普鲁兰酶活力达到20.16 U/mL,是之前研究结果(10.94 U/mL)的1.84倍.     

中性蛋白酶基因在大肠杆菌中诱导表达条件的研究

采用PCR方法从枯草芽孢杆菌中扩增得到中性蛋白酶基因npr,与表达载体pET-22b(+)连接构建成重组质粒pET22b-npr,转化大肠杆菌BL21得到重组工程菌株。经IPTG诱导,其所含有的中性蛋白酶基因可高效表达。研究不同的表达条件对中性蛋白酶表达水平的影响,发现当培养液的OD_(600)值达到0.6～0.8时,添加诱导剂IPTG至终浓度为0.8 mmol/L,28℃诱导7h,重组工程菌中性蛋白酶的表达量最高,SDS-PAGE电泳结果显示出明显的分子质量约43 ku的特异性蛋白条带。