高产蛋白酶菌株的筛选及产酶条件优化

从山西临汾汾河滩涂的表层土壤中分离到22株产蛋白酶菌株,用检测蛋白酶产生水解圈和蛋白酶活性测定相结合的方法,从中筛选出一株高产蛋白酶菌株P5,并通过正交试验对其产酶条件进行了研究。结果表明,影响P5菌株发酵产酶因素的主次顺序为培养温度、接种量、培养时间;影响P5菌株发酵培养基组成因素的主次顺序为氮源含量、起始pH值、碳源含量;确定的P5菌株的最佳产酶条件为,在以30 g/L葡萄糖为碳源,50 g/L蛋白胨为氮源,起始pH7.0的最适产酶培养基中,培养温度35℃,接种量为8%的条件下发酵培养48 h,具有最大产酶量,其蛋白酶活力可达129.2 U/mL。     

米曲霉菌今野菌株所产蛋白酶性质的研究

采用(m)2SO4盐析,再透析提纯得到今野菌株的蛋白酶,该酶热稳定性好,40℃保温5小时,剩余酶活为54%,采用正交试验,得其在反应过程中所受因素影响大小为pH＞酶液浓度＞底物浓度＞温度.酶反应的最适pH为7.0,最适温度为40℃.在以酪素为底物时,该蛋白酶的Km值为6.6‰,NaCl对其有抑制作用.抑制类型为非竞争性抑制.     

大蒜的检测方法进展

本文对大蒜的各种定量测定方法进行了总结。     

酶法制备花生粕醒酒多肽

为更合理有效地利用花生粕资源,制备具有醒酒作用的花生粕多肽,本实验以Alcalase AF 2.4L蛋白酶酶法制备花生粕醒酒肽,经分级分离后,通过体外和动物实验验证其醒酒效果。结果表明,花生粕醒酒肽制备最佳工艺条件为：酶解时间3 h、酶解温度35 ℃、pH 9.5及料液比1∶30（m/V）。该条件下乙醇脱氢酶（alcoholdehydrogenase,ADH）激活率及多肽得率均较高。经分级分离后,分子质量在1 000～3 000 D的多肽对ADH激活作用最强,激活率为30.47%。G25凝胶色谱分析表明,花生粕多肽中小于3 000 D的多肽占89.55%,ADH激活率为29.25%。动物实验证明,花生粕多肽对小鼠有显著的防醉醒酒作用。小鼠血液乙醇含量测定结果表明,高剂量的花生粕多肽在60～90 min内能显著降低小鼠血液中的乙醇含量。     

多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因对加工番茄果实成熟的影响

采用农杆茵(agrobacterium tumefaciens)介导法将多聚半乳糖醛酸酶(PG)反义基因导入新疆加工番茄(lycopersicon esculentum,品种代号98-75)。通过卡那霉素抗性筛选获得10株转化植株,PCR和Southern blot分析表明,其中4株为阳性植株,反义PG基因已整合到这4株加工番茄基因组中。转基因加工番茄的硬度和可溶性固形物含量高于同期对照果实;果实饱满有光泽;此4株转基因番茄果实的PG活性分别为对照番茄果实的83％、88％、63％和46％;脂氧合酶(LOX)活性下降;可溶性果胶含量在同期低于对照。Northem blot分析表明,转基因番茄果实的PG、LOX和LeEXPl基因表达水平下降。研究结果表明,转反义PG基因加工番茄果实成熟软化进程被延缓,果实品质有一定改善。     

覆膜Y型单子弹头气道支架治疗左主支气管胸膜瘘12例

【摘要】 目的 评估应用Y型单子弹头覆膜气道支架封堵残端较短的左主支气管胸膜瘘的临床效果。方法 回顾性分析2010年8月—2013年9月收治的12例残端较短的左主支气管胸膜瘘患者,根据这类患者支气管残端较短的解剖结构特点,个体化定制Y型单子弹头覆膜气道内支架。在X线监视下,12例患者共置入12枚Y型单子弹头内支架。观察患者支架置入后瘘口愈合情况。结果 12枚支架均一次性置入成功,内支架置入后瘘口即刻完全封堵,随访3 ～ 17个月;6例瘘口封堵良好,支架置入后3个月取出,瘘口愈合、残腔消失;5例复查胸部多排螺旋CT（MSCT）显示支架子弹头部周围软组织较薄,残腔较前明显缩小,未取出支架,继续负压引流,带支架生存至今。1例高龄患者,支架置入前已存在重度肺部感染,支架置入后瘘口虽即刻完全封堵,但术后未能控制原有肺部感染,加之体质虚弱,术后2周死于肺部重度感染和机体衰竭。结论 应用Y型单子弹头覆膜自膨式内支架封堵残端较短的左主支气管胸膜瘘患者的瘘口,近期临床效果可靠,值得推广应用。
     

β-Galactosidase with transgalactosylation activity from Lactobacillus fermentum K4

The LacLM β-galactosidase of Lactobacillus fermentum K4 is encoded by 2 consecutive genes, lacL (large subunit) and lacM (small subunit), that share 17 overlapping nucleotides. Phylogenetic analysis revealed that this enzyme was closely related to other Lactobacillus β-galactosidases and provided significant insight into its common and distinct characteristics. We cloned both the lacL and lacM genes of L. fermentum K4 and heterologously expressed each in Escherichia coli, although the recombinant enzyme was only functional when both were expressed on the same plasmid. We evaluated the enzymatic properties of this species-specific LacLM β-galactosidase and discovered that it acts as both a hydrolase, bioconverting lactose into glucose and galactose, and a transgalactosylase, generating prebiotic galacto-oligosaccharides (GOS). The recombinant β-galactosidase showed a broad pH optimum and stability around neutral pH. The optimal temperature and Michaelis constant (K_m) for the substrates o-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside and lactose were, respectively, 40°C and 45 to 50°C and 1.31 mM and 27 mM. The enzyme activity was stimulated by some cations such as Na⁺, K⁺, and Mg²⁺. In addition, activity was also enhanced by ethanol (15%, wt/vol). The transgalactosylation activity of L. fermentum K4 β-galactosidase effectively and rapidly generated GOS, up to 37% of the total sugars from the reaction. Collectively, our results suggested that the β-galactosidase from L. fermentum K4 could be exploited for the formation of GOS.     

酶解谷朊粉-卡拉胶复合体系凝胶特性研究

采用物性仪研究了酶解谷朊粉-卡拉胶复合体系的胶凝条件和凝胶特性。结果表明,酶解谷朊粉为300 mg/mL时仍是松软的糊状形态,添加0.3%卡拉胶时凝胶成形较好;随着卡拉胶浓度或酶解谷朊粉浓度增加,凝胶的黏性和弹性持续提高,而硬度则在0.3%卡拉胶或250 mg/mL谷朊粉时达到最高点后逐渐下降;随着加热温度增加或加热时间延长,凝胶的质构特性均呈现先逐渐增加后又下降的趋势。综合分析可知,在酶解谷朊粉300 mg/mL、卡拉胶0.3%8、0℃加热30 min条件下形成的复合凝胶硬度(252.822 g)、黏性(128.112 g.s)和弹性(0.045)均达到了较高值。     

野生酵母及其对啤酒生产的影响

讨论了啤酒生产常见野生酵母的种类及其对啤酒生产和质量的影响,并提出了野生酵母的检验和消除方法。     

气相色谱法同时测定多糖中的中性糖、糖醛酸、氨基糖和唾液酸

采用甲醇解和硅烷衍生化,用气相色谱法同时测定样品中的中性糖、糖醛酸、N-乙酰氨基糖和唾液酸,取得了很好的效果。3种标准单糖混合物(包含阿拉伯糖、鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、N-乙酰半乳糖、N-乙酰葡萄糖、5-乙酰唾液酸)和2种多糖样品(豆腐渣多糖DFP、鸡腿菇多糖F32)用1 mol/L盐酸甲醇在85℃反应18～24 h,碳酸银中和,加入乙酸酐室温暗处反应24 h,使氨基糖重新引入N-乙酰基,除银盐,干燥,加入硅烷化试剂[V(吡啶)∶V(六甲基二硅氨烷)∶V(三甲基氯硅烷)=5∶1∶1),室温放置30 min,最后用气相色谱进行分析。