海藻糖和褐藻胶寡糖对冻藏紫贻贝品质的影响

为探讨海藻糖和褐藻胶寡糖的低温保护活性,以紫贻贝为对象,评价了海藻糖和褐藻胶寡糖处理对冻藏紫贻贝肉品质特性的影响。结果发现,在6周冻藏过程中,相比于蒸馏水和空白组,海藻糖和褐藻胶寡糖显著(p0.05)降低了紫贻贝肉解冻损失率,褐藻胶寡糖组解冻损失率低至14.28%,并维持了较好的弹性和咀嚼性等特性,同时有效抑制了紫贻贝肉中菌落总数的快速增加。此外,两种糖类浸泡处理维持了较好的肌原纤维蛋白Ca~(2+)-ATPase活力,肌原纤维蛋白Ca~(2+)-ATPase活力在0.019～0.021U/mgprot范围内,三个处理组之间并无显著性差异(p0.05)。微观观察发现,海藻糖和褐藻胶寡糖处理紫贻贝,组织结构相对较为完整、致密,细胞间隙冰晶颗粒面积较小,其组织结构保护作用明显优于焦磷酸钠处理效果。海藻糖和褐藻胶寡糖可作为一种高效的低温保护剂,用于保持紫贻贝及其制品品质及延长冻藏产品货架期。     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

鲜活细点圆趾蟹中组胺菌的分离鉴定与生长特性

利用HBI培养基结合薄层层析法对活细点圆趾蟹腮条和内脏中的组胺菌进行筛选,并通过高效液相色谱法对组胺菌产组胺能力进行测定,再利用16SrDNA基因测序对其进行分子鉴定。同时,研究了温度、初始pH值、NaCl含量对组胺菌生长和组胺生成量的影响,以及壳低聚糖(COS)对组胺菌生长的抑制效果。结果显示,从细点圆趾蟹的腮条中分离获得1株组胺菌,经鉴定命名为Enterobacter aerogenes OP-G2,其组胺生成量为(46.96±1.94)mg/L(30℃培养48h)。低温(4℃)和/或高NaCl含量(≥10%)能有效控制E.aerogenes OP-G2菌株的生长和组胺的生成量,且对菌株组胺生成量的抑制率可高达92%以上。另外,当COS浓度≥0.5g/100mL时,对E.aerogenes OP-G2菌株抑菌率均在30.58%以上,且当pH 6.0时,1.0g/100mL浓度的COS对E.aerogenes OP-G2菌株抑菌率高达47.57%。     

乌贼墨黑色素的制备及体内外铅吸附效果研究

为研究乌贼墨黑色素体内外吸附铅的效果,采用水洗、酸洗和碱性蛋白酶酶解制备乌贼墨黑色素,以体外铅吸附量为指标确定黑色素制备方法,并通过扫描电镜及傅里叶变换红外光谱进行表征;建立铅中毒小鼠模型(饮用醋酸锌溶液),通过测定小鼠体重、肝脏系数和肝脏及血液的铅含量,分析黑色素在体内的吸附效果,利用HE染色法观察肝脏的病变情况。结果表明:通过碱性蛋白酶酶解法制得的黑色素体外吸附铅的效果优于另外两种方法,吸附量达(256.06±14.12)mg/g。扫描电镜和红外光谱实验证实吸附反应发生在黑色素颗粒表层,主要功能基团有-OH,-NH,-COOH。中、高剂量组对小鼠肝脏和血液中铅的吸附效果显著(p<0.01),分别下降17.18%±0.76%和31.09%±2.48%,20.85%±0.96%和34.45%±3.31%。HE观察显示黑色素对促进肝脏的修复有一定作用。由此可知,利用碱性蛋白酶酶解法制备乌贼墨黑色素有良好的吸附性能,具有作为一种安全吸附材料的应用前景。     

甲壳素清洁生产过程中柠檬酸钙回收工艺研究

以红虾虾壳为原料,通过碱性蛋白酶脱蛋白、柠檬酸脱钙制备甲壳素,结合超声辅助法,优化副产物柠檬酸钙回收工艺条件,并对甲壳素成品和柠檬酸钙进行主要质量指标检测。在单因素实验的基础上,通过Box-Behnken实验设计对柠檬酸浓度、液料比和超声时间进行优化,得出了柠檬酸钙回收的最佳工艺条件为:柠檬酸浓度10%,液料比12:1 mL/g,超声时间50 min,柠檬酸钙得率为93.49%±0.07%,甲壳素的得率达到18.93%±0.06%,甲壳素成品质量达到食品级标准,柠檬酸钙成品质量符合我国柠檬酸钙食品添加剂要求。本研究为甲壳素清洁生产过程中柠檬酸钙的回收利用提供科学的理论依据。     

三氮唑合铬(Ⅲ)配合物应激下三角帆蚌生化指标及营养组分的变化

本文以1,2,3-三氮唑-4,5-二羧酸为配体诱导合成了一种新型细胞小片处理剂—三氮唑合铬配合物,并对其结构进行了表征分析。采用体外模拟应激方式,探讨了三氮唑合铬配合物对三角帆蚌生化指标和营养组分的影响情况。结果表明:三氮唑铬配合物在浓度2.5 μg/g和10 μg/g时可以促进三角帆蚌蛋白质合成,在浓度40 μg/g时可以促进蛋白质代谢和增强碱性磷酸酶活性;三氮唑合铬配合物应激后,三角帆蚌体内的牛磺酸和不饱和脂肪酸相对含量显著提高(p<0.05);而且血清生化指标、氨基酸组分、脂肪酸组分之间分别存在一定相关性。由此表明,三氮唑合铬配合物能够促进三角帆蚌伤口愈合,促进珍珠质分泌,有助于珍珠的形成,同时能提高其免疫活性,从而提高珍珠的产量和质量。     

基于响应面优化的褶牡蛎中金属硫蛋白提取工艺研究

探究褶牡蛎中金属硫蛋白的提取方法并优化其分离制备工艺。以褶牡蛎为原料,采用Cd~(2+)诱导机体产生MT,然后根据单因素实验、Box-Behnken实验原理,以牡蛎组织与提取液物料比、提取温度、提取pH及缓冲液浓度为影响因素,以金属硫蛋白提取量作为响应值,进行牡蛎金属硫蛋白提取工艺响应面优化分析。结果发现,提取条件对金属硫蛋白提取量影响从大到小依次为:物料比提取pH值提取温度=缓冲液浓度,进而获得最佳提取工艺参数为:物料比1:4,提取液pH 9.0,提取温度30℃,缓冲液浓度0.25 mol/L,提取时间2 h。在此参数条件下,MT提取量为0.221 mg/g,该结果与模型的预测值基本相符。研究结果可为海洋源金属硫蛋白分离提取以及进一步的活性开发与应用,提供一定的参考与基础。     

双齿围沙蚕抗凝血肽的制备及其抗血栓作用

目的:探讨双齿围沙蚕抗凝血肽(anticoagulant peptides from Perinereis aibuhitensis,PAAP)的制备及其抗血栓作用。方法:以抗凝活力为检测指标,筛选最佳酶对沙蚕进行酶解。酶解产物经超滤、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱法分离纯化,得到具有最强抗凝活力的沙蚕寡肽,将此肽命名为PAAP并测定其急性毒性作用。采用角叉菜胶所致的小鼠尾部血栓形成实验、三氯化铁所致的大鼠动脉血栓形成实验及二磷酸腺苷(adenonisine disphosphate,ADP)诱导的血小板聚集实验,研究PAAP的抗血栓作用。结果:选取碱性蛋白酶作为最佳酶对沙蚕进行酶解,经过分离纯化后得到一条氨基酸序列:脯氨酸-缬氨酸-谷氨酸-精氨酸-赖氨酸(Pro-Val-Glu-Arg-Lys)。经测定,该寡肽的体外抗凝活力可达(1 320.0±20.3)U/g。PAAP的最大耐受量为11.0 g/(kg·d)且未出现小鼠异常及死亡现象,体内实验表明PAAP对小鼠尾部血栓的形成、大鼠动脉血栓的形成及ADP诱导的血小板聚集均有明显抑制作用。结论:从双齿围沙蚕中提取出的抗凝肽PAAP具有抗血栓作用。     

响应面法优化中性蛋白酶提取苦竹花多糖及多糖性质分析

目的:采用响应面法优化中性蛋白酶辅助提取苦竹花多糖的最优条件,并对提取得到的粗多糖进行分离纯化、理化性质及体外抗氧化性测定。方法:在单因素试验基础上,考察提取时间、酶添加量、提取温度对苦竹花粗多糖得率的影响。利用响应面试验建立数学模型,确定最佳提取条件。苦竹花粗多糖经分离纯化,获取2个组分,分别命名为SBH-1和SBH-2,其中以SBH-1为主要组分。通过高效凝胶渗透色谱和红外光谱对SBH-1组分进行单糖组成、分子质量及初步的结构研究。通过与VC对比,研究苦竹花粗多糖SBH-1的体外抗氧化活性,即1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率及抗脂质过氧化能力的测定。结果:在中性蛋白酶添加量0.83%,提取温度46.68℃,提取时间115.95 min条件下,粗多糖得率为7.63%。经检测苦竹花粗多糖SBH-1组分分子质量为18.3 k D,主要由甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)3种单糖组成比例为1.3∶2.3∶1.2。SBH-1对DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除EC_(50)分别为2.03 mg/mL和1.038 mg/mL。结论:采用中性蛋白酶辅助提取得到的苦竹花粗多糖简单易行,纯化得到的中性杂多糖SBH-1具有很好的活性,为进一步研究和开发提供理论基础。     

双齿围沙蚕多肽的制备及其抗肺癌A549细胞活性

探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1~3 ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化。采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化。实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶,其最佳酶解条件为:酶解温度50℃、pH 11、料液比1∶1(g/mL)、酶解时间6 h、加酶量300 U/g。经纯化获得的多肽命名为PAP,其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe,且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此,PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。