黑色素瘤的生物标志物:从基因组学到表观遗传学

黑色素瘤是一种发病率极高、极难治愈的皮肤恶性肿瘤,其中转移性黑色素瘤的5年生存率几乎为零。虽然化疗和免疫疗法(如抗PD-1/PD-L1单克隆抗体生物制剂)发展迅速,药物抵抗的高发率仍是治愈率低的主要问题。因此,目前研究热点逐渐转移至"运用生物标志物进行早期辅助诊断和药物反应预测"。随着检测技术的日新月异,很多新型生物标志物被发现,甚至已作为治疗靶点。本文从基因水平和表观遗传学水平总结黑色素瘤的生物标志物研究进展,并讨论其对疾病诊断、发展和治疗反应的预测价值,为寻找潜在治疗靶点提供新的思路。     

Fcy::Fur/5-FC基因治疗对小鼠宫颈癌的体内实验研究

目的:研究融合基因Fcy::Fur联合5-FC对宫颈癌移植瘤的生长抑制作用及其副反应.方法:构建宫颈癌U27瘤株的Km小鼠荷瘤模型,阳离子脂质体介导Fcy::Fur融合基因体内转染联合腹腔注射5-FC,观察肿瘤体积、重量、倍增时间、生长抑制率以及胃肠道副反应.结果(1)治疗结束时基因治疗组和5-FU组肿瘤体积和重量分别为2.224±0.60cm3、2.38±0.04g和2.32±0.68cm3、2.49±0.73g,小于对照组的4.42±1.49cm3、4.74±1.59g,P<0.05;肿瘤倍增时间由对照组的44.33±2.33h延长为基因治疗组和5-FU组的50.04±2.71h和49.52±3.21h,P<0.05;基因治疗组和5-FU组的肿瘤生长抑制率分别为49.83%和47.51%,两者在肿瘤体积、重量和倍增时间及生长抑制率方而比较均尤统计学意义,P>0.05.(2)5-FU组小鼠有明显的胃肠道反应,体重增长缓慢,与其它两组比较,P<0.05;而基因治疗组小鼠体重增长与对照组比较,P>0.05.结论:融合性自杀基因Fcy::Fur联合5-FC对小鼠宫颈癌移植瘤的生长有抑制作用,无明显胃肠道副反应.     

胞嘧啶-巴比妥酸分子间相互作用的密度泛函理论研究

用密度泛函理论研究了胞嘧啶(Cyt)-巴比妥酸(BA)分子间相互作用,以期从理论上预测巴比妥酸类物质对核酸可能产生的影响.在B3LYP/6-311G* *理论水平上优化复合物构型,得到5个Cyt-BA1,8个Cyt-BA2和9个Cyt-BA3稳定复合物,经基组重叠误差和零点振动能校正后,发现在3个系列中最稳定的复合物分别是Cyt-BA1-Ⅳ,Cyt-BA2-Ⅲ和Cyt-BA3-ⅤⅢ,其结合能各自为53.98,96.48和92.50 kJ/mol,相互作用能主要由氢键贡献.cyt与BA2-Ⅲ、BA3-Ⅸ以三氢键,其余均以二氢键形成复合物,其稳定性与氢键强度关系非常密切.分析自然键轨道而揭示相互作用的本质.用统计热力学求出常温下从单体形成复合物的热力学性质的变化,发现除Cyt-BA3-Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ外,Cyt与BA均可在常温下形成复合物.     

分子印迹流动注射化学发光测定胞嘧啶核苷

以胞嘧啶核苷为目标分子,合成对其有专一性识别的分子印迹聚合物(MIP)。在酸性条件下,利用HCl-KMn O4-HCHO发光体系,结合流动注射化学发光(FI-CL)分析方法,创建对胞嘧啶核苷测定有特异性识别的MIP-FI-CL分析方法,其线性范围为8×10-5~1×10-3mol/L,检出限为4×10-5mol/L。利用此方法测定复杂样品中胞嘧啶核苷的含量,结果令人满意。     

3,3-二乙氧基丙腈合成工艺研究与表征

以乙腈、一氧化碳和乙醇钠为初始原料,乙醇为催化剂,合成出3,3-二乙氧基丙腈。通过对反应温度、反应物料配比、后处理过程对产物的分离方式进行研究,确定出合理的工艺条件。该合成工艺反应操作压力为0.3～1.5MPa,经济成本低,产率高。     

组织中全基因组DNA甲基化的液相色谱-串联质谱分析

建立液相色谱-串联质谱测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚氯仿提取组织DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,用甲醇溶解,以液相色谱-串联质谱检测胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中DNA甲基化的水平。结果表明,胞嘧啶的线性范围为1~100μg.L-1,相关系数为0.997 4,相对标准偏差为0.70%~4.09%;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1~50μg.L-1,相关系数为0.994 8,相对标准偏差为0.60%~4.81%。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为1 pg,日内相对标准偏差为1.86%~4.67%,日间相对标准偏差为3.72%~4.68%,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加样回收率为86.52%~105.14%。本研究所建立的方法检测组织中DNA甲基化程度,具有专一性强、操作简便的优点,能较好的满足全基因组DNA甲基化检测的要求。     

Solution and Thermodynamic Studies on Binary and Ternary Complexes of Lanthanides

The interactions of La(Ⅲ), Pr(Ⅲ), Nd(Ⅲ), Sm(Ⅲ), Eu(Ⅲ), Gd(Ⅲ), Dy(Ⅲ), and Yb(Ⅲ) with cytosine, 5-bromocytosine, 5-azacytosine and 5-flurocytosine as primary ligands (L) and guanine (A) as secondary ligand for both binary (1:1) as well as ternary (1:1:1) systems were investigated by potentiometric equilibrium measurements at 25, 35 and 45 ℃ in aqueous solution (ionic strength, μ=0.1 mol·dm-3 NaNO3). The stability constants of the binary (1:1) and ternary (1:1:1) metal-ligand complexes follow the following order La＜Pr＜Nd＜Sm＜Eu＞Gd＜Dy＞Yb. Results also indicate that the ternary lanthanide complexes of La(Ⅲ), Pr(Ⅲ), Nd(Ⅲ), Sm(Ⅲ), Eu(Ⅲ), Gd(Ⅲ), Dy(Ⅲ), and Yb(Ⅲ) are more stable than corresponding binary lanthanide complexes. The enthalpy (Δhof) and entropy (Δsof) changes for the formation of binary and ternary complexes were calculated from temperature coefficient data. The ΔΔSof values are positive for all the metal ligand systems. The negative ΔΔHof values indicate the extra stability of the ternary complexes by the exothermic enthalpy changes (ΔΔSof=ΔTSof-ΔBSof and ΔΔHof=ΔTHof-ΔBHof where ΔTSof, ΔTHof and ΔBSof, ΔBHof are the entropy and enthalpy values associated with the ternary and binary complexes, respectively). It was also proposed that the guanine is bonded to metal ions through N1/C6=O and N7 whereas cytosine and its derivatives are bonded through N3 atoms in ternary complexes.