脂质体VEGFR2胞外区基因肿瘤疫苗的制备及其免疫激活体外抗肿瘤活性研究

目的：制备脂质体（LP）携带VEGFR2胞外区（exVEGFR2）肿瘤抗原pCMV质粒复合物基因疫苗，为肿瘤免疫治疗提供新的主动免疫疗法。方法：RT-PCR扩增含2个KpnⅠ和XbaⅠ限制性酶切位点的exVEGFR2序列，将其与pCMV质粒连接，构建pCMV/exVEGFR2质粒。Western blot检测exVEGFR2体外表达水平。用制备好的脂质体pCMV/exVEGFR2复合物（LP-pCMV/exVEGFR2）免疫C57BL/6小鼠，ELISA法检测其免疫激活活性。利用51Cr释放实验分析CTLs介导的细胞毒活性。结果：成功扩增到exVEGFR2序列，并构建pCMV/exVEGFR2质粒；只有在pCMV/exVEGFR2转染COS-7细胞中，检测到与目的蛋白序列大小一致的相对分子质量为90 000的VEGFR2特异性条带。LP-pCMV/exVEGFR2免疫小鼠6周后，ELISA法检测到强烈的特异性抗VEGFR2免疫激活效应；其免疫T细胞能够有效地介导体外VEGFR2阳性的CT-26结肠癌细胞毒性。 结论：LP-pCMV/exVEGFR2能够有效地激活小鼠产生特异性抗VEGFR2免疫应答效应，并产生体外抗肿瘤细胞免疫毒性，为后期研究主动免疫治疗VEGFR2阳性肿瘤奠定实验基础。     

探访美国榛子的奥秘

美国大榛子,原产中国,19世纪末引入到美国.在美国已经有100多年历史.美国99％榛子产于美国俄勒冈州的Willamette Valley.由于当地适宜的气候和丰富的降水量,使得种出来的榛子比世界其他地区的都要大.榛子含有人体必需的8种氨基酸及多种微量元素和矿物质,对于人体健康有许多好处.近年来,美国榛子出口中国的步伐不断加快,正成为消费者的新宠,以及食品工业的重要配料之一.在FIC 2014展览现场,记者对Hazelnut Growers of Oregon（美国榛子协会）旗下的WESTNUT公司市场推广经理Lucas Schmidt就美国榛子在中国市场的发展状况和趋势进行了交流.     

编织空间的旋律

有人说，去美国科罗拉多州的阿斯彭市几乎不算是去到美国。这是因为，这座建成于19世纪的城市与美国整体的节奏完全不同。这里就像是一个世外桃源，滑雪、度假、音乐会、艺术才是这里真正的主旋律。而阿斯彭艺术博物馆，正是在这样一个特殊的环境里，以独特的建筑语言编织着空间艺术的美妙旋律。     

副流感病毒5型CC-14株辅助质粒的构建及鉴定

目的构建副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)CC-14株核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和聚合酶蛋白(large protein,L)基因真核表达质粒,并在MDCK细胞中表达,为该病毒反向遗传系统的建立奠定基础。方法根据PIV5 CC-14株全基因组中的NP、P和L基因分别设计特异性引物,经RT-PCR扩增得到NP、P和L基因,酶切后分别连接至pc DNA3.1+真核表达载体(或p MD18-T)上,构建辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L,转染MDCK细胞,RT-PCR检测NP、P和DL基因的转录情况。结果经双酶切及测序鉴定证明辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L构建正确,3个质粒转染MDCK细胞后,经RT-PCR分别可扩增得到NP、P和DL基因片段。结论成功构建了PIV5 CC-14株pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L辅助质粒,且均可在MDCK细胞中有效转录,为该病毒反向遗传系统的建立奠定了基础。     

治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂的稳定性

目的考察治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B的稳定性。方法按照《中国药典》三部(2010版)方法,对治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B分别进行影响因素试验、加速试验、长期试验,在不同条件下考察样品的基本性状,特别检测质粒DNA的超螺旋比例及进行细胞学转染试验和体内药效学试验。结果双质粒HBV DNA疫苗制剂在破坏性因素的影响下,于光照(4 500±500)Lx、高温(40和60℃)、反复冻融(-20℃←→4℃和-20℃←→RT)条件下5 d均不稳定;匀速振动(140和240 r/min)10 d不稳定;在(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置1个月不稳定;在温度2~8℃条件下放置2年保持稳定。结论双质粒HBV DNA疫苗制剂对光照、温度敏感,应避光低温保存,避免反复冻融,适合现代快速长途运输,长期保存应在2~8℃条件下,暂定二年有效期,为治疗性双质粒HBV DNA疫苗的临床用样品的运输和保存提供了依据。     

一种质粒DNA标准物质的定值数据统计及不确定度评定

为研制一种质粒DNA标准物质,应用紫外分光光度法(UV)和高分辨电感耦合等离子体质谱法(HR-ICPMS)对质粒DNA标准物质候选物的浓度进行测定,统计定值结果,并对测量的不确定度进行评定。最终,质粒DNA标准物质的浓度表示为(75.1±2.1)ng/μL(k=2)。     

PAB-Gal4-DBD-HA-Twist重组质粒的制备

目的:构建人Twist基因的表达载体pAB-Gal4-DBD-HA-Twist,为研究其转录调控机制提供实验工具。方法:重组克隆质粒pcDNA-Flag-Twist用含有特异BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物进行聚合酶链反应;对含有两种酶切位点的目的 Twist基因片段和pAB-Gal4-DBD-HA载体进行酶切、分离、回收纯化、连接后转入感受态DH5α中,细菌培养,菌落聚合酶链反应、测序鉴定。结果:鉴定结果显示,Twist基因正确克隆到PAB-Gal4-DBD-HA表达载体,并且转入了大肠杆菌中。结论:成功构建了人twist基因PAB-Gal4-DBDHA-Twist表达载体,为进一步研究其表达、调控、作用机制奠定基础。     

文化美学视域下的文学研究——读曾思艺先生的《19世纪俄国唯美主义文学研究》

曾思艺教授的《19世纪俄国唯美主义文学研究》不仅是其国家社科基金的结项成果,而且还是国内第一部俄国唯美主义文学研究专著。该书运用比较研究的方法,以大量史料为依托,通过文本细读,从中发掘俄国唯美主义文学的特点、影响与价值,具有相当的学术分量。作者视野开阔,思路清晰,论述严谨,富有创见,必将推动国内外俄国文学研究的进程。