Selective and differential enumerations of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Bifidobacterium spp. in yoghurt--a review

Yoghurt is increasingly being used as a carrier of probiotic bacteria for their potential health benefits. To meet with a recommended level of ≥ 10⁶ viable cells/g of a product, assessment of viability of probiotic bacteria in market preparations is crucial. This requires a working method for selective enumeration of these probiotic bacteria and lactic acid bacteria in yoghurt such as Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lb. acidophilus, Lb. casei and Bifidobacterium. This chapter presents an overview of media that could be used for differential and selective enumerations of yoghurt bacteria. De Man Rogosa Sharpe agar containing fructose (MRSF), MRS agar pH 5.2 (MRS 5.2), reinforced clostridial prussian blue agar at pH 5.0 (RCPB 5.0) or reinforced clostridial agar at pH 5.3 (RCA 5.3) are suitable for enumeration of Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus when the incubation is carried out at 45 °C for 72 h. S. thermophilus (ST) agar and M17 are recommended for selective enumeration of S. thermophilus. Selective enumeration of Lb. acidophilus in mixed culture could be made in Rogosa agar added with 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucopyranoside (X-Glu) or MRS containing maltose (MRSM) and incubation in a 20% CO₂ atmosphere. Lb. casei could be selectively enumerated on specially formulated Lb. casei (LC) agar from products containing yoghurt starter bacteria (S. thermophilus and Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus), Lb. acidophilus, Bifidobacterium spp. and Lb. casei. Bifidobacterium could be enumerated on MRS agar supplemented with nalidixic acid, paromomycin, neomycin sulphate and lithium chloride (MRS-NPNL) under anaerobic incubation at 37 °C for 72 h.     

动物双歧杆菌乳亚种XLTG11对克林霉素诱导的抗生素相关性腹泻的改善作用

目的：通过克林霉素诱导抗生素相关性腹泻(antibiotic-associated diarrhea,AAD)模型,探究动物双歧杆菌乳亚种XLTG11缓解小鼠AAD的作用。方法：将48只6周龄C57BL/6N雄鼠随机分为4组：对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,除对照组外,各组小鼠连续14 d灌胃克林霉素(250 mg/(kg m_b·d))诱导AAD模型,然后低剂量组和高剂量组灌胃不同剂量(0.2 mL,5×10⁶、1×10⁷ CFU)动物双歧杆菌乳亚种XLTG11,测定小鼠体质量增长量、盲肠质量、粪便含水量和粪便稠度,测定结肠肿瘤坏死因子α、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、IL-1β、IL-10水平,血清脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和D-乳酸质量浓度,测定肠道菌群组成及短链脂肪酸含量,以及肠道屏障和核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路相关基因表达水平。结果：高剂量动物双歧杆菌乳亚种XLTG11显著提高AAD模型小鼠的体质量增长量和...     

对虾原肌球蛋白致敏小鼠模型的构建及乳酸菌肠黏膜免疫效应对致敏性的影响

以原肌球蛋白（tropomyosin,TM）为主要过敏原,腹腔注射6 周龄BALB/c雌、雄小鼠,从第14天开始给治疗组小鼠口服灌胃长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp.）1.2202或芽孢乳酸菌09.712（Bacillus coagulans 09.712）,连续灌胃20 d。根据小鼠腹泻情况、过敏症状评分、血清中组胺（histamine,HIS）质量浓度、TM特异性免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）E水平变化构建TM致敏及益生菌治疗小鼠模型;通过氯乙酸萘酚酯酶染色、高碘酸希夫试剂特殊染色法检测各组小鼠肠道部位的肥大细胞和杯状细胞,通过免疫组化法检测各组小鼠肠道部位的CD4＋ T细胞和嗜酸性粒细胞;探究肠黏膜免疫在TM致敏及益生菌缓解TM致敏作用中的机理。结果表明：雌性小鼠更适用于构建TM致敏模型;益生菌灌胃可以通过降低血清中HIS质量浓度和IgE水平缓解肠黏膜免疫反应,减轻TM过敏症状。本研究从肠黏膜免疫反应角度探究了其在TM致敏中的作用,为食物过敏的研究提供参考。     

巨大芽孢杆菌L2发酵产物对魔芋软腐病菌的抑菌机制

目的：探究巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）L2发酵产物对贮藏期魔芋软腐病菌——胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora subsp. carotovora）EC-1的抑菌机制。方法：以巨大芽孢杆菌菌粉为原料提取发酵产物,用常压硅胶柱层析分离得到发酵产物流分LE4-1～LE4-7,经抑菌实验筛选得到对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用的流分,再使用气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）法对其进行成分分析;并通过测定其半数抑制质量浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）、菌液电导率、核酸蛋白泄漏、可溶性总糖质量浓度、菌体总蛋白、菌体磷代谢及胞内活性氧水平对其抑菌机制进行研究。结果：巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用,经GC-MS检测其主要成分为苯乙酸乙酯（32.190%（相对含量,后同））、亚油酸乙酯（15.819%）、苯乙酸甲酯（13.793%）等;LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1的IC50为（1.06±0.01）mg/mL,并初步推测其作用机制是通过影响细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制细胞蛋白质合成及能量代谢等对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1发挥抑菌作用,因此巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3在魔芋抗软腐病贮藏中具有良好的应用前景。     

玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化研究初探

目的研究玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化的方法。方法以玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii)菌株为材料,分离纯化其内切葡聚糖酶Egase。制备EGase浓缩液,浓缩液经Sephradex~(TM)G-75凝胶过滤层析和DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换柱层析等提纯步骤,获得了凝胶电泳均一的内切葡聚糖酶。结果经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为一条电泳带,纯化后的EGase是单体蛋白,分子量约为72.3 k Da。Egase酶反应的最适温度是60℃,最适pH为5.0。结论本研究从玉米细菌性枯萎病菌中分离得到了一种新的内切葡聚合糖酶,对其部分性质进行了表述,为后续EGase基因的克隆及表达研究提供了研究基础。     

海藻酸钠-微晶纤维素在SETR中包埋纳豆芽孢杆菌的固定化研究

目的 考察海藻酸钠-微晶纤维素在新型软弹式反应器(soft elastic tubular reactor, SETR)中对菌株的包埋作用。方法 使用海藻酸钠(sodium alginate, SA)与微晶纤维素(microcrystalline cellulose, MC)制成海藻酸钠-微晶纤维素水凝胶(microcrystalline cellulose/sodium alginate microcapsule, SA-MC)并包埋纳豆芽孢杆菌, 以光学显微镜形态、微球直径为指标, 单因素法优化SA与MC的配比和包埋时间; 并对优化好的SA-MC进行pH溶胀实验; 应用24 r/min的挤压频率进行发酵, 观察SA-MC在该过程中对pH的影响。结果 SA与MC以1:3的比例混合, 包埋时间1 h效果最佳; SA-MC对pH的响应并不敏感, 可用于发酵环境对菌株的包埋和保护; 与空白相比, SA-MC在SETR发酵环境中对pH有缓冲效果。结论 在SETR环境中SA-MC包埋纳豆芽孢杆菌表现较好的包埋作用。后续将进一步优化包埋材料的配方, 并对不同发酵参数的影响规律进行深入研究。本研究为天然材料包埋益生菌, 并旨在为SETR的应用推广提供理论支持。     

椰毒假单胞菌酵米面亚种及其毒素的最新研究进展

在我国中北部地区,由椰毒假单胞菌酵米面亚种引起的食物中毒事件频有发生,中毒食物多为变质的发酵玉米面制品、长时间泡发的木耳和变质的银耳等。然而近年来南方地区相关中毒案例显著增长,广东传统河粉等米面淀粉制品存在被椰毒假单胞菌污染致人中毒死亡的风险,其毒素的致死率高,危害性强,受到全社会的高度关注。本综述总结了椰毒假单胞菌酵米面亚种及其毒素米酵菌酸在理化、生化、检测技术、污染状况和影响因素的最新研究进展,并对鲜湿米粉中毒事件作出思考,为后续的相关研究提供理论基础。     

利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究

以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体.采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,以提高电转化效率.结果表明:选择含2.5%甘氨酸的SMRS培养基培养受体细胞至对数中期,收获制成感受态细胞,在电场强度12 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF条件下电击转化,以含20 mmol/L MgCl2、CaCl2的SMRS培养基复苏培养2 h,涂板筛选得到较高的电转化效率.特别是采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率提高30倍以上,达到6.3×104cfu/μg DNA.本研究结果为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株提供试验依据.